[发明专利]用于增殖病毒的方法

说明书

技术领域

本公开涉及水产养殖业、养鱼业领域和出现在养殖鱼密集群中的感染性疾病。具 体地，其涉及增殖在鲑科(Salmonidae)中导致疾病的病毒的方法。

背景技术

水产养殖业是世界上发展最快的食品生产部分，且养鱼业(鱼养殖)将是满足对于 动物蛋白的增长要求的主要贡献者。然而，集约生产，包括饲养密集鱼群，导致出现了几种 新的传染性疾病。

于1999年首次检出的心脏和骨骼肌炎症(HSMI，heartandskeletalmuscle inflammation)是养殖的大西洋鲑(SalmosalarL.)中越来越重要的疾病。鲑鱼是鲑科，条 辐鱼(ray-finnedfish)族，其是目前鲑目分类中唯一存活的科。这些也可以称为鲑科鱼。 鲑科包括鲑鱼(salmon)、鳟鱼(trout)、红点鲑鱼(斑鲑，chars)、淡水白鲑(freshwater whitefishes)和河鳟(graylings)。(1)中讨论了HSMI。

HSMI往往发生在将鱼转移至海水之后的5-9个月，且由心外膜炎、心内膜炎和心肌 炎、心肌坏死、红骨骼肌的肌炎和坏死表征。累积死亡率可以达到20％，但是发病率更高，因 为受影响海域中的大多数鱼表现出心脏中的组织病变。在大西洋鲑中的其他疾病中也可以 看到心脏的病理变化，包括胰腺疾病(PD)和心肌病综合症(CMS)。(2)

近年来发现HSMI与新型呼肠孤病毒(reovirus)、鱼正呼肠孤病毒(PRV，piscine orthoreovirus)有关。使用高通量测序识别了病毒基因组，公开了PRV基因组。呼肠孤病毒 属于呼肠孤病毒(Reoviridae)科且公知其感染胃肠系统和呼吸道。鱼呼肠孤病毒属于刺突 呼肠孤病毒(Spinareovirinae)亚科中现今分类的属(3)。

鱼正呼肠孤病毒(PRV)具有断开的双链RNA基因组，属于呼肠孤病毒科且是与正呼 肠孤病毒属相关的唯一已知的鱼病毒。其他已知的鱼呼肠孤病毒分组在水生呼肠孤病毒 (Aquareovirus)属中，但是系统进化分析指示PRV属于普通正呼肠孤病毒和水生呼肠孤病 毒属的同根分支。PRV具有10个基因组片段，正呼肠孤病毒也是，但是同源蛋白质之间的总 体氨基酸一致性非常低，特别是对于表面暴露的蛋白质和非结构蛋白质尤其如此。然而，蛋 白质功能中心的几个氨基酸基序对正呼肠孤病毒和PRV是保守的。与大多数的正呼肠孤病 毒不同，但与哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV)类似，PRV是非融合的(fusogenic)(4，5)。PRV普 遍分布于养殖的和野生的大西洋鲑中，且心脏中高负荷的病毒是与HSMI发作一致的发现。 在挪威、加拿大和智利已经发现了养殖的大西洋鲑中PRV的普遍存在，且在挪威的野生大西 洋鲑和斑鳟(browntrout)(SalmotruttaL.)、和加拿大的野生大麻哈鱼(Chumsalmon) (Oncorhynchusketa)、虹鳟鱼(O.mykiss)和割喉鳟(O.clarkii)中也检测到了该病毒。PRV 感染导致疾病的机制在很大程度上仍然是未知的。(6，7)。

Finstad等人(8)通过免疫组织化学(针对PRV表面蛋白σ1的抗体)示出PRV存在于 心肌细胞和血细胞中。血细胞中的存在看起来在心肌细胞中的病毒检测之前。

因此鱼正呼肠孤病毒(PRV)是心脏和骨骼肌炎症(HSMI)的病原体。HSMI通过浸润 单核CD8阳性细胞由心外膜炎、心内膜炎和心肌炎以及红骨骼肌中的心肌炎表征(9)。

PRV编码外层纤维蛋白(outer-fiberprotein)(σ1/σC)的同源蛋白，其存在于正 呼肠孤病毒属中的大部分成员中。在MRV中，σ1蛋白起病毒血凝素和细胞粘附蛋白(cell attachmentprotein)的作用，且用于这种结合的重要的氨基酸残基在PRVσ1蛋白中是部分 保守的(4)。

通常使用的鱼细胞系中的PRV培养目前为止还没有成功。通过RT-qPCR测得PRV的 负荷与原初和实验感染的鲑鱼两者中的疾病发展相关。