[发明专利]用于合成加利车霉素衍生物的中间体和方法

说明书

发明领域

本发明涉及加利车霉素(calicheamicin)衍生物的合成。本发明还涉及可用于制备加利车霉素衍生物和使加利车霉素与生物大分子例如单克隆抗体缀合的中间体和连接体分子。

发明背景

(吉妥珠单抗奥佐米星)由通过酸可水解的连接体与加利车霉素结合的CD33的单克隆抗体组成。该商品作为第一种抗体靶向的化疗剂上市销售且被批准用于治疗老年患者的急性髓性白血病(AML)。伊珠单抗奥加米星是目前处于治疗某些类型癌症的临床试验中的连接至加利车霉素的CD22抗体。

共同称作加利车霉素或LL-E33288复合物的抗(细)菌药和抗肿瘤药的有效家族公开在美国专利No.4,970,198中。美国专利No.5,053,394也公开了甲基三硫化物抗(细)菌药和抗肿瘤药。美国专利No.4,970,198和美国专利No.5,053,394中的这些化合物包含甲基三硫化物基团，其可以与适合的硫醇类反应，形成二硫键，同时引入官能团，例如酰肼或类似亲核体。美国专利No.5,053,394中给出了这种与加利车霉素反应的实例。美国专利No.5,770,701涉及用于制备LL-E33288复合物的二硫化物化合物的靶向形式的方法。连接体4-(4-乙酰基-苯氧基)丁酸与N-乙酰基γ加利车霉素二甲基酰肼化合物缩合，得到羧酸-腙，进一步将其用N-羟基琥珀酰亚胺处理，得到OSu酯(N-琥珀酰亚氨基氧基)，其易于与选择的生物大分子缀合。

美国专利No.8,273,862描述了用于构建连接体中间体分子(其中被称作“三连接体-活化的酯类”或“三官能连接体中间体”)的合成方法。这些连接体中间体可以与加利车霉素缀合，以便制备加利车霉素衍生物，然后加利车霉素衍生物可以进一步与生物大分子，例如单克隆抗体缀合。在这些导致制备连接体中间体的步骤中，美国专利No.8,273,862中所述的合成方法使用巯基化合物(其中的“化合物2”)、例如3-甲基-3-巯基丁酸酰肼作为中间体。

WO 2008/147765描述了用于合成包含巯基的中间体，例如3-甲基-3-巯基丁酸酰肼的方法，其可用于制备如上述段落中所述的连接体中间体酸和加利车霉素衍生物。WO 2008/147765还涉及3-甲基-3-巯基丁酸酰肼作为“DMH连接体”。WO 2008/147765注意到，就使加利车霉素连接至单克隆抗体以制备例如吉妥珠单抗奥佐米星或伊珠单抗奥加米星的目的而言，3-甲基-3-巯基丁酸酰肼是优选的包含巯基的N-酰基肼。

在WO 2008/147765中，化合物3-甲基-3-巯基丁酸酰肼是通过在酸性条件下从对甲氧基苄基硫醚酰肼上除去苄基保护基制备的。为了得到对甲氧基苄基硫醚酰肼，WO 2008/147765教导了首先使对甲氧基苄基硫醚酸与草酰氯在二氯甲烷中反应，形成对甲氧基苄基硫醚酰氯。然后将对甲氧基苄基硫醚酰氯加到无水肼和二氯甲烷的混合物中，得到对甲氧基苄基硫醚酰肼。然而，正如WO 2008/147765中所述，所述两种反应物对甲氧基苄基硫醚酸和对甲氧基苄基硫醚酰氯它们自身一起生成不期望的副产物双甲氧基苄硫醚酰肼，导致较低的收率和质量。此外，正如WO 2008/147765中所述，由于酰氯分子对甲氧基苄基硫醚酰氯的反应性和不稳定的性质，必须使用无水肼和低温，例如-70℃。

制备加利车霉素衍生物中的另一方面包括使加利车霉素与连接体分子化学连接。为了使加利车霉素与美国专利No.8,273,862中的连接体中间体缀合，进行加利车霉素与“三连接体活化的酯”(或“三官能连接连接体中间体”)之间的最终反应。结构上，如上文所解释，加利车霉素包含以其衍生形式使用的三硫化物部分，且加利车霉素的三硫化物部分与三连接体活化的酯之间的这种反应的化学在实现良好收率和纯度方面是重要的。以前使用的用于加利车霉素衍生物的硫交换反应得到了复杂的反应混合物、多种副产物和低收率。

最终，加利车霉素衍生物在其形成后被纯化。美国专利No.8,273,862的方法包括纯化加利车霉素衍生物，该方法包括正相色谱法步骤。美国专利No.8,273,862中所述的纯化方法中的正相色谱法步骤使用二氯甲烷作为溶剂，且如上所述，暴露于高于各种最低水平的二氯甲烷被视为形成潜在的健康危害。因此，当使用包括二氯甲烷的正相色谱法法时，必须小心限制暴露于二氯甲烷。

发明概述