[发明专利]包含表达偏肺病毒(hMPV)抗原的重组活BCG的免疫原性制剂，其以无需佐剂地从冻干物制备的悬浮液形式存在并且适合于其制药用途

说明书

本发明描述了用于在哺乳动物中针对人偏肺病毒(hMPV)进行使用的免疫原性制剂，其由1×10⁹cfu/ml的表达(基因群(genogroup)A1、A2、B1和B2的)hMPV的病毒蛋白P的重组BCG的冻干物组成。所述疫苗源自hMPV的基因P的完全或部分产物，其可以无需佐剂地以溶液形式进行使用、稳定化和施用。制备物还可以包含上面所描述的制剂的组合。所述制剂可以通过冻干(4℃至8℃的保存范围)来进行稳定化，以便以后在其使用前在无佐剂的盐水溶液中进行重构。

发明领域

本发明涉及免疫学和生物技术领域，特别地涉及待用于制备针对人偏肺病毒(hMPV)的疫苗的基于重组减毒细菌的免疫原性制剂。所述制剂包含表达hMPV的蛋白P这种抗原性肽的重组卡-介杆菌(BCG)。

发明背景

人偏肺病毒(此后，hMPV)是与上和下呼吸道的急性呼吸系统疾病相关的高住院百分比和发病率的病因学因子，特别是在婴儿、老年人和无免疫应答的个体中。由该病毒引起的感染与宽范围的病理学状况相关，其中细支气管炎和肺炎属于具有较大社会经济影响的情形。另外，它与胃肠炎和角膜结膜炎相关。Calvo等人(2008)在3年的时间段中证明，由呼吸道病毒RSV、ADV和hMPV引起的急性呼吸道感染的累积发病率对于64.5％的小于2岁的儿童的住院负有责任，其中对于所述病毒中的每一种而言发病率分别为35.4％、19.3％和9.8％。hMPV与其他具有高发病率的呼吸道病毒所共有的一个令人感兴趣的特征为在整个幼年期间产生反复感染，这是一种可能与在生命的最初几个月期间在建立针对初次感染的保护性免疫应答方面的失败相关的现象。该最后的现象激发了在公共卫生系统中对于能够控制呼吸道感染每年爆发的新的疫苗原型的急迫需要，从而使得能够减少医疗中心的拥堵和最终减少与这些感染相关的社会经济影响。迄今为止，还没有关于hMPV感染引起的特别的经济影响的研究，然而，由hMPV造成的住院发生率据估计为由人呼吸道合胞病毒(hRSV)造成的住院发生率的1/3。在发达国家中进行的研究估计，hRSV感染的个体花费为大约3,000欧元($1,860,000智利比索)，其中具有直至8,400欧元($5,200,000智利比索)的上限。考虑到需要住院的病理学过程具有相似的特征，暗示了关于个体住院的花费是近似的。

病毒hMPV被归类为副粘病毒科(Paramyxoviridae)的肺病毒亚科(Pneumovirinae)，这是与hRSV被归类为的相同的分类，虽然它们各自分别被分组在偏肺病毒属(Metapneumovirus)和肺病毒属(Pneumovirus)中。hMPV的基因组由负义的不分节段的单链核糖核酸(ssRNA)组成，因此病毒蛋白质以3’至5’的方向(关于其序列)按下列形式进行安排：N、P、M、F、M2(ORF1和2)、SH、G和L。这些蛋白质中的五个负责遗传物质的包装和确定病毒颗粒的特有结构，它们分别相应于核衣壳蛋白N和基质蛋白M，以及跨膜糖蛋白F、G和SH。其他四个蛋白质M2-1、M2-2、P和L参与病毒的复制和转录。存在两种亚型的hMPV，它们基于主要在蛋白F和G中的序列差异而被划分为A和B(关于两个抗原组)。虽然这些蛋白质具有一定程度的差异，但是相对于由病毒基因组所编码的其他蛋白质而言，存在高度的同一性。

针对呼吸道病毒的疫苗的开发始于20世纪60年代，其中采用基于通过福尔马林灭活的病毒(hRSV-FI)的最初的针对hRSV的疫苗原型，其具有很大的副作用，这阻碍了在免疫接种计划中的使用。伴随有氢氧化铝佐剂的肌内制剂在经疫苗接种的儿童中产生了比在未进行疫苗接种的那些被感染个体中更严重的状况。该效应与针对感染的免疫应答的超反应性相关，所述超反应性以升高的多形核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的实质浸润以及升高的补体结合性抗体的滴度为特征。