[发明专利]酸性α-葡糖苷酶中反义诱导的外显子2纳入

说明书

本发明涉及反义寡核苷酸和相关的组合物以及用于诱导的外显子纳入作为治疗II型糖原贮积病(GSD‑II)(也称为庞帕病、II型糖原病、酸麦芽糖酶缺乏(AMD)、酸性α‑葡糖苷酶缺乏，和溶酶体α‑葡糖苷酶缺乏)的方法，并且更具体地涉及诱导外显子2的纳入并由此恢复由GAA基因编码的酶促活性酸性α‑葡糖苷酶(GAA)蛋白的水平。

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2013年9月5日提交的美国申请号61/874,261和2014年1月27日提交的美国申请号61/932,195的优先权；其全文各自通过引用纳入本文。

关于序列表的声明

与本申请相关的序列表以文本形式代替纸质版提供，并且因此通过引用纳入说明书。包含序列表的文本文件的名称为SATH_001_02WO_ST25.txt。该文本文件为约62KB，其在2014年9月5日生成，并且通过EFS-Web电子提交。

背景

发明领域

本发明涉及反义寡聚体和相关的组合物以及用于诱导的外显子纳入作为对II型糖原贮积病(GSD-II)(也称为庞帕病、II型糖原病、酸麦芽糖酶缺乏(AMD)、酸性α-葡糖苷酶缺乏和溶酶体α-葡糖苷酶缺乏)的治疗的方法，并且更具体地涉及诱导外显子2的纳入并由此恢复由GAA基因编码的酶促活性酸性α-葡糖苷酶(GAA)蛋白的水平。

相关领域描述

可变剪接通过从单一基因产生多个蛋白质增加了人基因组的编码潜力。不合适的可变剪接也与不断增加的人类疾病相关。

GSD-II是一种由称为酸性α-葡糖苷酶(GAA)的酶的缺乏所导致的遗传常染色体隐性溶酶体贮积症。GAA在体内的作用是降解糖原。GAA活性水平的降低或缺失导致糖原在受影响的组织，包括心脏、骨骼肌(包括参与呼吸的那些)、肝脏和神经系统中积累。这种糖原积累被认为在患有GSD-II的个体中导致进行性肌无力和呼吸功能不全。GSD-II可发生于婴儿、小儿或成人，并且其预后根据发作的时间和症状的严重性而变化。临床上，GSD-II可能以广泛且连续的严重谱产生影响，范围从严重(婴儿)到较温和的迟发成人形式。患者最终由于呼吸功能不全而死亡。疾病的严重性与残留的酸性α-葡糖苷酶活性之间有良好的相关性，该活性在迟发中是正常情况的10-20％并且在疾病的早发形式中不到2％。估计GSD-II在全世界影响大约5000至10000人。

与疾病的成人发生形式相关的最常见突变是IVS1-13T＞G。在三分之二的成人发生的GSD-II患者中发现，这种突变可能在杂合个体中赋予选择性优势或者是非常老的突变。带有这种突变的成人发生的GSD-II个体的广泛族群变化与常见发现对立。

GAA基因由跨20kb的20个外显子组成。3.4kb mRNA编码大约105kD的分子量的蛋白。IVS1-13T＞G突变导致丢失外显子2(577个碱基)，其含有起始AUG密码子。

对GSD-II的治疗已经包括药物治疗策略、饮食处理，和骨髓移植，而没有明显成功。近年来，酶替换疗法(ERT)已向GSD-II患者提供新的希望。例如，一种重组GAA蛋白药物，在2006年在美国和欧洲得到批准用于患有GSD-II疾病的患者。依赖于GAA蛋白表面上的甘露糖-6-磷酸(M6P)来递送至溶酶体。

最常用于RNA下调的反义技术(antisense technology)近来已经适用于改变剪接过程。对许多基因的主要基因转录本(前体mRNA)的处理包括去除内含子和精确剪接外显子，其中供体剪接位点联接至受体剪接位点。剪接是一个精确的处理过程，包括配位识别供体和受体剪接位点，以及分支点(受体剪接位点上游)和其余的正外显子剪接增强子(主要位于外显子内)和负剪接基序(主要位于内含子内的剪接沉默子)。

能够改变GAA前体mRNA的剪接的有效试剂可能在治疗上用于GSD-II的改善的治疗。

概述