[发明专利]应用改变的辅助噬菌体制备抗原结合分子的方法

说明书

制备展示抗原结合分子的噬菌体的方法，其特征在于，包含使能够表达第一多肽的辅助噬菌体与能够表达第二多肽的细菌接触的步骤，该第一多肽与该第二多肽缔合形成该抗原结合分子。

技术领域

[相关申请]

本专利申请基于2013年9月30日申请的日本国专利申请2013-203528号主张优先权，同时所述在先专利申请中的全部公开内容通过引用成为本说明书的一部分。

本发明在一个实施方式中涉及制备展示抗原结合分子的噬菌体的方法等。

背景技术

抗体在血浆中的稳定性高、副作用也少，因此作为药品而受到关注。其中，有多个IgG型抗体药物上市，目前还有多个抗体药物在开发(非专利文献1和非专利文献2)。另一方面，作为可适用于第2代抗体药物的技术，开发了各种技术，报道了提高效应子功能、抗原结合能力、药物动力学或稳定性的技术或降低免疫原性风险的技术等(非专利文献3)。

作为使抗体高功能化的方法之一，双特异性抗体（bispecific antibody; BsAb）等的多特异性抗体近年来得到关注。BsAb是通过在1个分子内具有能够结合2个不同的抗原决定簇（表位）的部位而能够与2种抗原结合的多价抗体中的一种。

BsAb中通常包含2种H链和2种L链，制备BsAb时的问题是，将这些H链和L链导入1个细胞表达时，免疫球蛋白的H链以及L链随机组合，因此可能产生10种不同的抗体分子（非专利文献4、专利文献1）。产生的10种抗体中，具有期望的双特异性的抗体只有通过组合正确的H链和L链、进一步组合结合特异性不同的2组H链以及L链对而构成的1种抗体。

作为用于解决该问题的方法，已知将产生的H链有效地异二聚化的方法。例如，已知的是，向2个CH3结构域导入彼此立体互补的结构的方法（非专利文献5、专利文献2）；利用IgG与IgA的CH3结构域不彼此结合的性质，将2个CH3结构域通过以IgG衍生的序列和IgA衍生的序列相互不同地置换而仅制成期望的组合的方法（SEEDbodies: 非专利文献6）；通过向CH3结构域导入突变、利用2个H链的电荷相互作用促进二聚化的方法（专利文献3）等。

但是，通过这些方法制备的H链也仍然可以与错误的L链形成对。因此，报告了促进H链的异二聚化、同时制备具有共同L链的多特异性抗体的方法。作为获得共同的L链的方法，已知的是，通过制备L链的文库、将其与2个抗体的H链连续地组合筛选能够与各自的抗原结合的抗体，获得共同L链的方法（专利文献4）；从L链的所有组分受限的抗体文库获得与不同的抗原结合的抗体、从这些之中选择具有同一L链的抗体的方法（非专利文献7、专利文献1）；制备改组2种抗体L链的CDR而成的嵌合L链、筛选能够与两种抗原结合的共同L链的方法(非专利文献8)；免疫导入了特定L链基因的转基因小鼠获得L链是共同的抗体的方法（专利文献5、专利文献6）；从导入了特定L链基因、仅H链具有多样性的抗体文库，获得与不同的抗原结合的抗体，获得L链是共同的抗体的方法（非专利文献14）等。

另外，作为其它方法，也已知的是，通过改变H链和L链的恒定区促进选择性异二聚化的方法(专利文献3)；通过交叉H链可变区/L链可变区（VH/VL）或H链恒定区CH1/L链恒定区（CH1/CL）制备仅期望的异二聚体的方法（Crossmab: 专利文献7)；配制2种抗体之后、通过体外二硫键异构化制备双特异性抗体的方法（DuoBody: 专利文献8）等。

另外，与获得共同的H链的方法相关联，已知应用共同H链文库、以及L链文库，获得对各种抗原的抗体之后，通过共同H链和2种L链(κ链、λ链)制备双特异性抗体的方法（Kappa-Lambda Body：专利文献11）。