[发明专利]针对肺炎链球菌进行保护的富含脯氨酸的肽

说明书

发明领域

本发明涉及由肽链组成的聚集成合成病毒样颗粒的多聚化脂肽，所述肽链包含平 行卷曲螺旋结构域、富含脯氨酸的肽抗原和脂质部分，它们均通过共价连接。这些携带富含 脯氨酸抗原的合成病毒样颗粒用作抵抗由革兰氏阳性菌例如肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)导致的感染性疾病的疫苗。

发明背景

革兰氏阳性细菌(包括链球菌(Streptococci)或葡萄球菌(Staphylococci))是众 多严重性疾病的病原体和病原，所述疾病包括肺炎、脓毒症、脑膜炎、伤口感染、心内膜炎、 急性风湿热、新生儿脓毒症或中毒性休克综合征。因此，对于开发抵抗这些病原体的疫苗存 在需求。已经得到用于一些肺炎链球菌血清型的疫苗；它们存在缺陷，例如高度复杂性的生 产过程。

肺炎链球菌是高度不同的多糖包裹的甲型溶血性链球菌，其通常定居于人鼻咽并 且可以导致非侵害性肺炎球菌性疾病，例如中耳炎、窦炎和非菌血症性肺炎，和更严重性的 侵害性疾病，例如菌血症/脓毒症、脑膜炎和菌血症性肺炎，主要是在年轻的儿童和中老年 人中。

多糖荚膜是侵害过程中主要的毒力决定因素并且防止C3b调理素作用和嗜中性粒 细胞的非调理素杀伤作用。目前得到批准的疫苗包含单独地配制在肺炎球菌多糖菌苗 (PPSV)中的荚膜多糖抗原类或在肺炎球菌缀合物疫苗(PCV)中与载体蛋白例如修饰的白喉 毒素CRM197缀合的荚膜多糖抗原类。存在40种血清群中的90种以上的不同荚膜血清型。

多糖肺炎球菌菌苗可以提供血清型-特异性保护作用，但交叉保护作用甚至在同一血清群中较低。在2000年，在美国引入缀合疫苗后已经观察到了血清型的替代品。在新出现的血清型中还有多重耐药荚膜-切换变体。因此，对于下一代靶向非荚膜的其它抗原的肺炎球菌疫苗存在需求。

用于包含入下一代肺炎球菌疫苗的一种潜在的抗原是肺炎球菌表面蛋白A (PspA)。PspA是单体多态胆碱(cholin)-结合蛋白并且包含N-末端α-螺旋部分，其与自身形 成反向平行的卷曲螺旋，即富含脯氨酸的区，其中有时分散有相对保守的非脯氨酸区段和 包含多个胆碱结合结构域重复的C-末端区。

PspA的N-末端区包含免疫显性表位。包含该区的重组蛋白和表达该区的细菌载体 已经在各种模型中显示保护潜能。例如，Langermann等人已经制备了表达PspA的重组卡介 苗(BacilleCalmette-Guérin)(rBCG)载体。为了能够锚定细菌膜中的PspA，使PspA-衍生 的基因片段与Mtb19脂蛋白融合(参见LangermannS.等人,J.Exp.Med.1994,180,2277- 2286)。存在于应用PspA作为疫苗抗原相关的安全性担忧，因为N-末端区可以模拟人肌球蛋 白，且由此免疫接种包括该区的免疫原可能导致组织交叉反应性抗体。因此，近期进行尝试 使用PspA的其它区作为抗原。可以适合于包含入下一代肺炎球菌疫苗的另一个PspA区是富 含脯氨酸的区。尽管PspA的富含脯氨酸的区(PRR)是多态的，但是它包含几个保守的基序， 包括短氨基酸基序，如PKP、PAPAP、PEKP和存在于一些PspA分子中的高度保守的非脯氨酸区 段(NPB)(Brooks-Walter,A.等人,InfectImmun1999,67,6533-6542；Hollingshead,S.K. 等人,InfectImmun,2000,68,5889-5900；Daniels,C.C.等人,InfectImmun,2010,78, 2163-2172.)。尽管PRR不含免疫显性表位，但是使用酶联免疫测定法(EIA)与硫氧还蛋白 (Trx)融合蛋白作为抗原在儿童中检测到了针对该PspA部分的抗体(Melin,M.等人, Vaccine2012,30,7157-7160)。因为NPB是高度保守的，所以作者推定针对PRR的抗体可以与 大部分菌株通过其NPB表位识别发生交叉反应。