[发明专利]在Fc间隔物区中具有突变的嵌合抗原受体(CAR)及其使用方法

说明书

使用经由表达嵌合抗原受体(CAR)遗传重定向的T细胞的过继免疫疗法是一种用于癌症治疗的有希望的方法。然而，此免疫疗法部分依赖于CAR的最佳分子设计，其牵涉通过间隔物和/或跨膜序列与胞内信号传导域连接的胞外配体结合域。

优先权要求

本申请要求2014年1月13日提交的美国临时专利申请号61/926,881的优先权，通过提及以其全文(包括附图)并入本文。

政府利益的声明

本发明在国家健康研究所(NIH)授予的拨款号P50CA107399和P01CA030206下得到政府支持而完成。政府具有本发明的某些权利。

发明背景

使用表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞的过继免疫疗法是一种有希望的癌症治疗，因为这些细胞能以不依赖于人白细胞抗原(HLA)的方式直接识别并杀死表达抗原的肿瘤细胞。然而，除了靶肿瘤关联抗原的仔细选择外，此治疗方法高度依赖于CAR的最佳分子设计。

虽然已经在各种系统中显示了含有TAA特异性scFv的CAR，其经由与CD3-zeta融合的胞质共刺激(例如CD28或4-1BB)域产生胞内信号，展现出显著的抗肿瘤效力(Brentjenset al.2013；Brentjens et al.2011；Grupp et al.2013；Kalos et al.2011；Kochenderfer et al.2012)，但是被宿主免疫学排斥和清除仍然是有效癌症治疗的挑战。

已经使用CAR设计中的某些修饰来防止FcR介导的对治疗细胞的清除。例如，可以使用不源自Ig Fc域的铰链/间隔物序列，诸如那些来自CD8α或CD28的(Brentjens etal.2007；Kalos et al.2011；Imai et al.2004；Kochenderfer et al.2009)。虽然这些间隔物序列可以减轻FcR结合，但是当靶向某些抗原时，其长度不能赋予CAR T细胞最佳的效力。例如，当使用CAR T细胞靶向5T4、NCAM和MUC1时，最佳的效力需要较长的接头区(即长于那些源自CD8α或CD28的接头)(Wilkie et al.2008；Guest et al.2005)。如此，会期望设计解决这些挑战，同时维持其在杀死癌细胞中的效力的CAR。

发明概述

根据一些实施方案，提供了对Fc受体(FcR)具有受损的结合的重组嵌合抗原受体(CAR)。此类CAR可以包括但不限于抗原识别域，源自经修饰的免疫球蛋白Fc区的间隔物域，和胞内信号传导域，所述经修饰的免疫球蛋白Fc区在其CH2区中具有导致受损的对FcR的结合的一个或多个突变。

在另一个实施方案中，提供了由病毒载体转导的人免疫细胞群体，所述病毒载体包含包括CAR基因的表达盒。在一些方面中，CAR基因包含核苷酸序列，所述核苷酸序列编码抗原识别域，源自经修饰的免疫球蛋白Fc区的间隔物域，和胞内信号传导域，所述经修饰的免疫球蛋白Fc区在其CH2区中具有导致受损的对FcR的结合的一个或多个突变，其中所述人免疫细胞群体表达所述CAR基因。

在另一个实施方案中，提供了治疗受试者中的癌症的方法。此类方法包括对所述受试者施用用CAR基因转导的人免疫细胞群体。在一些方面中，CAR基因包含核苷酸序列，所述核苷酸序列编码靶向对所述癌症特异性的癌症关联抗原的抗原识别域、源自经修饰的免疫球蛋白Fc区的间隔物域，和胞内信号传导域，所述经修饰的免疫球蛋白Fc区在其CH2区中具有导致受损的对FcR的结合的一个或多个突变。

设计具有降低或受损的对FcR的结合的间隔物域(诸如本文中描述的那些)的CAR帮助防止表达FcR的细胞在体内识别并破坏，或者无意地活化表达CAR的免疫治疗细胞。因此，此类CAR帮助防止免疫排斥和细胞的清除，意图对患者提供治疗益处。

附图简述