[发明专利]用于生产双特异性抗体的细胞的制备和挑选

权利要求书

1.一种方法，用于制备适合生产双特异性抗体的细胞，所述方法包括：

用一种试剂孵育多个真核细胞，在此条件下使细胞停留于G1/S期；

从该细胞中去除该试剂；

转染该细胞，用含有编码针对第一抗原具有特异性的第一单价抗原结合单元序列的第一载体和含有编码针对第二抗原具有特异性的第二单价抗原结合单元序列的第二载体；和

鉴别来自所述多个细胞中同时表达所述第一和第二抗原结合单元的细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述试剂为胸苷。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述第一或第二载体进一步包含编码荧光蛋白的序列。

4.如权利要求1所述的方法，其中每一载体进一步包含编码荧光蛋白的序列以显示不同的荧光。

5.一种方法，用于测定细胞生产和分泌双特异性抗体，其中该细胞已转染包含编码针对第一抗原具有特异性的第一单价抗原结合单元的序列的第一载体和包含编码针对第二抗原具有特异性的第二单价抗原结合单元的序列的第二载体，所述方法包括：

将所述细胞与(i)一种复合体，包含细胞结合试剂和第一抗原，和(ii)第二抗原接触，在此条件下使该复合体结合至所述细胞表面，所述第一抗原结合至所述第一抗原结合单元，所述第二抗原结合至所述第二抗原结合单元；和

检测所述第二抗原连接到所述细胞，由此测定该细胞生产和分泌包含所述第一抗原结合单元和所述第二抗原结合单元的所述双特异性抗体。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述第二抗原是用第一荧光颜色所荧光标记的，并且其中所述检测包括鉴别显示所述第一荧光颜色的细胞颗粒。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述第二抗原是用第一荧光颜色所荧光标记的，并且所述载体的至少之一包含编码具有第二荧光颜色的荧光蛋白序列，并且其中所述检测包括鉴别同时显示所述第一荧光颜色和所述第二荧光颜色的细胞颗粒。

8.一种方法，用于测定细胞生产和分泌双特异性抗体，其中该细胞已转染包含编码针对第一抗原具有特异性的单价抗原结合，单链可变片段(scFv)序列的第一载体和包含编码针对第二抗原具有特异性的重链和轻链共同形成的单价抗原结合单元序列的第二载体，所述方法包括：

将所述细胞与(i)一种复合体，包含细胞结合试剂和第一抗原，和(ii)对轻链具有特异性的抗体接触，在此条件下使该复合体结合至所述细胞表面，所述第一抗原结合至所述第一抗原结合单元，所述抗体结合至轻链；和

检测抗体连接到细胞，由此测定该细胞生产和分泌包含所述scFv和具有重链和轻链的抗原结合单元的所述双特异性抗体。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述抗体是用第一荧光颜色所荧光标记的，并且其中所述检测包括鉴别显示该第一荧光颜色的细胞颗粒。

10.如权利要求9所述的方法，其中该抗体是用第一荧光颜色所荧光标记的，并且该第一载体进一步包含编码具有第二荧光颜色的荧光蛋白的序列，及其中所述检测包括鉴别同时显示所述第一荧光颜色和所述第二荧光颜色的细胞颗粒。

11.一种方法，用于测定细胞生产和分泌双特异性抗体，其中该细胞已转染包含编码针对第一抗原具有特异性的单价抗原结合、单链可变片段(scFv)序列的第一载体和包含编码针对第二抗原具有特异性的重链和轻链共同形成的单价抗原结合单元序列的第二载体，所述方法包括：

将所述细胞与(i)一种复合体，包含细胞结合试剂和对轻链具有特异性的抗体，和(ii)第一抗原接触，在此条件下使该复合体结合至所述细胞表面，所述第一抗原结合至所述第一抗原结合单元，所述抗体结合至轻链；和

检测所述第一抗原连接到细胞，

由此测定该细胞生产和分泌包含所述scFv和具有重链和轻链的所述抗原结合单元的双特异性抗体。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述第一抗原用第一荧光颜色所标记，并且其中所述检测包括鉴别显示第一荧光颜色的细胞颗粒。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述第一抗原是用第一荧光颜色所荧光标记的，并且该第一载体进一步包含编码具有第二荧光颜色的荧光蛋白序列，以及其中所述检测包括鉴别第一荧光颜色和第二荧光颜色都显示的细胞颗粒。