[发明专利]一种非诊断目的检测ApoA5生物学活性的方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201510002639.8 | 申请日： | 2015-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN104480185A | 公开（公告）日： | 2015-04-01 |
| 发明（设计）人： | 赵水平;罗俊;郑小燕;聂赛;赵旺 | 申请（专利权）人： | 中南大学湘雅二医院 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;G01N23/00 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 410011 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 诊断 目的 检测 apoa5 生物学 活性 方法 试剂盒 | ||
1.一种非诊断目的检测ApoA5生物学活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将细胞与放射性核素标记的ApoA5孵育，去除细胞膜上结合的ApoA5，裂解细胞，检测细胞裂解液的放射强度和细胞蛋白浓度，获得第一放射活性；
将细胞与LRP1小干扰RNA混合，获得沉默LRP1表达的细胞；将所述沉默LRP1表达的细胞与放射性核素标记的ApoA5孵育，去除细胞膜上结合的ApoA5，裂解细胞，检测细胞裂解液的放射强度和细胞蛋白浓度，获得第二放射活性；
比较所述第一放射活性与所述第二放射活性，获得ApoA5生物学活性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育的时间为1～5小时，温度为37℃。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述放射性核素为125I。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LRP1小干扰RNA的浓度为1～10nmol/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合的时间为4～8小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述去除细胞膜上结合的ApoA5具体为：加入肝素溶液孵育1～5分钟后，去除肝素溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解采用的试剂为氢氧化钠。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞为HL-1心肌细胞或脂肪细胞。
9.一种检测ApoA5生物学活性的试剂盒，其特征在于，包括HL-1心肌细胞、ApoA5、Na4125I、LRP1小干扰RNA、肝素和氢氧化钠。
10.一种检测ApoA5生物学活性的试剂盒，其特征在于，包括3T3-L1前体脂肪细胞、ApoA5、Na4125I、LRP1小干扰RNA、肝素和氢氧化钠。
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