[发明专利]一种灰树花多糖的提纯方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从食用菌中提纯生物活性物质的方法，特别涉及一种利用微波提取—HD-8阳离子交换树脂纯化集成工艺提纯灰树花多糖的方法。

背景技术

灰树花又名栗子蘑、莲花菌、千佛菌等，是一种珍贵的药食兼用真菌，口味鲜美，富含多种生物活性物质、矿物质与维生素等。其主要生物活性物质灰树花多糖是近年来研究的热点。

众多药理与临床试验证实，灰树花多糖具有抗肿瘤，降血压，调节血糖、血脂水平，抗HIV病毒，增强免疫系统功能的作用，尤其是抗肿瘤活性，日本医学专家实验发现灰树花多糖肿瘤抑制率可达86.2％，比国际公认的抗癌新药香菇多糖抑制率高32％。对癌细胞生成和转移防治、高血压、糖尿病、艾滋病及免疫系统功能紊乱均有一定的疗效，且无毒副作用。因此，灰树花多糖的制备工艺备受关注，具有良好的开发前景。

目前，国内外灰树花多糖提取物产品还很少见，文献中更多是用水提醇沉工艺法提取和脱蛋白及色素等杂质，或者是用传统的提取方法如热水提取法、酸提法、碱提法等联合一般的脱蛋白纯化方法如醇沉法、Sevage法，三氯乙酸法等提纯多糖，存在操作时间长、有机试剂用量大、效率低、效果差等缺点，多糖的得率和纯度都受到很大的限制，不利于工业化生产制备多糖产品。

因此，研究灰树花多糖提纯方法，开发操作便捷，高效，低成本的灰树花多糖的制备工艺，对于降低产品价格，增加产品附加值具有重大的经济效益，并满足市场需求，为社会增益。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作便捷、成本低即经济高效的提纯药食两用真菌灰树花多糖的方法，以满足工业化生产需要。该发明提纯工艺亦可应用于其他食用菌。具体技术方案如下：

一种灰树花多糖的提纯方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将灰树花粉碎，选用粒径为20目的灰树花，在pH为6的去离子水中进行微波提取，得到灰树花多糖提取液；

(2)将树脂用去离子水反复浸洗，然后用NaOH溶液浸泡18～24h，再用盐酸溶液浸泡18～24h，最后用去离子水浸洗，待用；

(3)将步骤(2)处理过的树脂进行湿法装柱，形成树脂床层后，静置过夜备用；使用前用去离子水过柱，将树脂柱活化；

(4)将步骤(1)得到的灰树花多糖提取液取适量装入步骤(3)的活化树脂柱，收集流出液，即为脱蛋白纯化后灰树花多糖提纯液。

步骤(1)中微波提取的装置的输出功率为500～650W，频率为2450MHz，辐射过程中鼓泡搅拌；液固比为20～40mL/1g，提取时间为60s～270s。

微波提取一段时间，提取液冷却至室温后，需要进行称重补水，再抽滤。

预处理的树脂是氨基酸分离专用树脂HD-8阳离子交换树脂。

步骤(2)中将树脂用去离子水反复浸洗的方法如下：浸洗时每隔5～10分钟换一次水，并不时搅动，换水4～5次后，再每隔15～20分钟换水一次，浸洗至浸洗水不褐色为止。

步骤(2)中所述NaOH溶液的浓度是0.5～1mol/L，其溶液体积是树脂体积的3～5倍，浸泡树脂的前两个小时内不断搅动，用水冲洗，直至浸泡水pH值为6～7。

步骤(2)中所述盐酸溶液的浓度是0.5～1mol/L，其溶液体积是树脂体积的3～5倍，将树脂转成H⁺型，盐酸浸泡后，用去离子水浸洗，至pH值为6以上时，即可进行装柱。

称取20g预处理过的HD-8阳离子交换树脂湿法上柱，将去离子水注入层析柱内(1.5×50cm)，赶走空气；再将经过步骤(2)处理的HD-8阳离子交换树脂加入去离子水混合至适宜稠度，灌注入层析柱内，使其自由沉降；沉降结束形成树脂床层后，静置过夜备用。

步骤(4)中将80～100mL去离子水以0.5～2.5mL/min的流速流过树脂柱，重复操作3遍，即可上样。

步骤(4)中所述灰树花多糖提取液中蛋白质的浓度为0.15～0.5mg/mL。

所述的灰树花多糖溶液的上样量为200～500mL，上样浓度：蛋白质浓度为0.15～05mg/mL，采用苯酚硫酸法检测多糖浓度，用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白含量。

本发明的方法，与其他工艺相比，具有如下优点：

(1)避免使用有机溶剂，液固比30mL/g，微波提取，提取率高达22.75％，与酶法提取率相当，但微波提取更节省时间(只有210s)，不使用酶制剂，减少杂质的带入，比传统热水浸提法的得率提高了50％多，具有省时高效，减少耗能，提升产率等优点。