[发明专利]一种快速定量检测肌钙蛋白I的均相荧光免疫试剂组及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种快速定量检测肌钙蛋白I的均相荧光免疫试剂及其制备方法。

背景技术

冠心病已成为影响人群健康的主要疾病。急性心肌梗死则是造成冠心病人死亡的主要原因。如何及时地发现急性心肌梗死病人及其相应的治疗是挽救心肌梗死病人生命的关键所在。传统的诊断主要是根据典型的临床表现，心电图的改变及实验室酶学检查。但相当一部分心肌梗死病人临床表现不明显，早期心电图无明显改变。在这种情况下，心肌损伤特异性标志物的应用对心肌梗死的早期确诊就起到了关键的作用。肌钙蛋白I(Cardiac troponin I，cTnI)是一重要的心肌组织损伤特异性标识物，临床用于急性心肌梗死及其它心肌损伤性疾病的诊断。

肌钙蛋白复合体是由3个亚基组成，3个亚基分别是肌钙蛋白T、肌钙蛋白I及肌钙蛋白C。钙蛋白T是原球蛋白结合亚基，主要调节肌钙蛋白复合体与细肌丝间的相互作用。肌钙蛋白I是肌原纤维AFP酶的抑制性亚单位。肌钙蛋白C是钙离子结合部分，主要调节钙离子依赖型的肌肉收缩。肌钙蛋白I的基因长约6.2Kb，可以编码205个氨基酸。cTnI非常特异地仅在心肌中，在肌肉及其它组织中从没有发现cTnI。cTnI以不同形式存在于心肌细胞中，其中胞浆内游离的cTnI只占4.1％，为可溶性，大部分与肌钙蛋白T及C亚单位结合在一起，以复合体的形式存在。当心肌损伤时，外周血中cTnI主要为与TNC形成的二聚体(IC)，此外cTnI还有可能以氧化型、还原型、磷酸化、去磷酸化、蛋白降解形式释放。因cTnI分子质量较CK-MB小，对心肌损伤很敏感，“微型心肌损伤”cTnI即可出现阳性结果，而此时CK-MB未增高或处正常高限。当心肌细胞膜的完整性受破坏，cTnI先从胞浆内释放，因此血清水平很快升高，而结合的cTnI由于相对分子质量大，从心肌细胞结构蛋白缓慢持续的释放，心肌损伤后4～6h释放入血，达到诊断决定值。心肌缺血症状发作后14～36h出现高峰，高峰出现时间与血中CK、CK-MB相似。持续3～7天，部分病例14天时仍可测到。最近文献指出，测定血清cTnI诊断AMI的敏感性为97％，特异性为98％，预测值为99.8％。故cTnI增高往往对于心肌损伤的诊断很有价值。90年代以来，对肌钙蛋白的大量临床研究表明，肌钙蛋白具有心肌损伤的高度的特异性和敏感性。美国临床化学学会(NACB)及国际检测医学联合会(TFCC)建议:心肌肌钙蛋白是检测心肌损伤的新的标志物；中国检验学会推荐由心肌肌钙蛋白逐步取代CK-MB成为检出心肌损伤的新标准。

cTnI的测定始于20世纪80年代中期，多采用双抗体竞争放射免疫法和竞争性ELISA测定法。有研究者将金标记或硒标记单克隆抗体与免疫层析技术相结合，用纸条法半定量床边检测cTnI浓度，最低检测值为0.4μg/L。目前cTnI的检测多采用化学发光法，用化学发光物质标记后作为检测抗体，大大提高了测定的精确性和敏感性，但现在通用的cTnI测定方法尚无标准化，不同的方法采用不同的抗体识别位点，所以在使用商品cTnI试剂盒时，必须研究商品试剂的特性。但目前的床旁检测方法—胶体金试纸法，不能满足临床诊断准确定量的要求，无法对AMI的病程起到很好的疗效监测作用。因此，建立一种检测时间尽量缩短，并且检测除了能在实验室进行外，还要求能够进行床旁检测，同时能定量测定cTnI的检测方法，从而为临床提供准确的诊断依据，是十分必要的。

均相荧光分析法(homogeneous fluoroimmunoassay，HFIA)是在时间分辨荧光免疫分析(time-resolued fluoroimmunoassay，TRFIA)技术的基础上形成的一种新的荧光免疫分析技术。TRFIA技术采用的荧光物质与传统的荧光染料完全不同，采用的是镧系元素铕(Eu)、锝(Tb)等作为荧光材料，灵敏度非常高，稳定性好，低温条件可保存三年，因而成为二十一世纪最热门的免疫分析技术。