[发明专利]一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法

权利要求书

1.一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，包括以下步骤：

步骤1)菌种活化：以嗜热脂肪芽孢杆菌为菌种，将菌种接种于活化培养基表面，在50～60℃下培养12～24h后，所述菌种长出菌苔；所述活化培养基由以下重量份的材料组成：10重量份的胰蛋白胨、5重量份的大豆蛋白胨、5重量份的酪蛋白胨、5重量份的氯化钠、15重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水；

步骤2)菌体增殖：将含所述菌苔的活化培养基加入到增殖培养基中，在50～60℃环境中，转速100～250rpm条件下培养12h；所述增殖培养基由以下重量份的材料组成：5～10重量份的胰蛋白胨、5～10重量份的大豆蛋白胨、5～10重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的氯化钠和1000重量份的蒸馏水；

步骤3)菌体筛选：在无菌平皿中加入筛选培养基，并在筛选培养基的表面覆盖无菌滤纸1～5张，将步骤2)所得菌液加到无菌滤纸上，在50～60℃下培养24h；所述筛选培养基由以下重量份的材料组成：1～5重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的酵母提取物、1～5重量份的牛肉浸膏、0.01～0.1重量份的KH₂PO₄、0.1～1重量份的MnSO₄·H₂O、0.1～1重量份的MgSO₄·2H₂O、0.01～1重量份的CaCl₂·2H₂O、10～20重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水；

步骤4)芽孢诱导：将步骤3)中的无菌滤纸放入产孢培养基中，在50～60℃环境中，转速100～200rpm条件下培养12h后，改变温度至30～50℃，继续培养12h，得到嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢；所述产孢培养基由以下重量份的材料组成：1～5重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的酵母提取物、0.01～0.1重量份的NaCl、0.1～1重量份的MnSO₄·H₂O、0.1～1重量份的MgSO₄·2H₂O、0.01～1重量份的CaCl₂·2H₂O、5～10重量份的PEG6000、0.5～5重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水。

2.根据权利要求1所述的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，其特征在于，在所述活化培养基、增殖培养基、筛选培养基和产孢培养基中用HCl或NaOH调节pH在7.0～7.3之间。

3.根据权利要求1所述的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，其特征在于，所述增殖培养基由以下重量份的材料组成：7.5重量份的胰蛋白胨、7.5重量份的大豆蛋白胨、7.5重量份的酪蛋白胨、3重量份的氯化钠和1000重量份的蒸馏水。

4.根据权利要求1所述的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，其特征在于，所述筛选培养基由以下重量份的材料组成：3重量份的酪蛋白胨、3重量份的酵母提取物、3重量份的牛肉浸膏、0.05重量份的KH₂PO₄、0.5重量份的MnSO₄·H₂O、0.5重量份的MgSO₄·2H₂O、0.5重量份的CaCl₂·2H₂O、15重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水。

5.根据权利要求1所述的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，其特征在于，所述产孢培养基由以下重量份的材料组成：3重量份的酪蛋白胨、3重量份的酵母提取物、0.05重量份的NaCl、0.5重量份的MnSO₄·H₂O、0.5重量份的MgSO₄·2H₂O、0.5重量份的CaCl₂·2H₂O、7.5重量份的PEG6000、2.5重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水。

6.根据权利要求1所述的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，其特征在于，在步骤3)中无菌滤纸的数量为5张，且选取第三张或第四张滤纸放入步骤4)的产孢培养基中。