[发明专利]一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物芽孢诱导领域，具体涉及一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，特别涉及一种可用于大规模生产的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法。

背景技术

嗜热脂肪芽孢杆菌为革兰阳性菌，需氧或兼性厌氧，利用葡萄糖产酸不产气。嗜热脂肪芽孢杆菌可产芽孢，最佳生长温度为55-60℃，最高生长温度为65-75℃，属于嗜热菌。中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)收藏编号为CICC：10267，即ATCC：7953。

嗜热脂肪芽孢杆菌所产芽孢无致病性、无热原、无毒。其芽孢对一定灭菌因子有确定的抗力，尤其对压力蒸汽的抗力强于大多数微生物，因此在我国，欧洲，美国，日本等地作为热力灭菌生物指示剂的标准菌株。嗜热脂肪芽孢杆菌含有多种抗药性隐蔽质粒，因此在国标GB/T4789.27-2008中规定了运用嗜热脂肪芽孢杆菌抑制法检测鲜乳中的抗生素含量。嗜热脂肪芽孢杆菌及抗生素残留检测方法(专利号：2009100662870，公开了一种利用嗜热脂肪芽孢杆菌检测抗生素的方法)。嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢因其特性，在消毒检验监测领域的应用越来越广泛。因此对芽孢生成机理及诱导条件等方面的工作需要继续深入。

目前，现有技术中，已经可以实现对嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢进行小剂量的制备，但在大规模量产时，却存在许多技术障碍：1)如何在固态的培养基上简便高效地刮取大量的高活性高产率的菌株；2)如何开发出一款成本低廉，适合大批量生产的诱导产孢培养基。

发明内容

针对上述不足之处，本发明的目的是提出一种成本低廉，操作简便，可大规模制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，包括以下步骤：

步骤1)菌种活化：以嗜热脂肪地芽孢杆菌为菌种，将菌种接种于活化培养基表面，在50～60℃下培养12～24h后，所述菌种长出菌苔；所述活化培养基由以下重量份的材料组成：10重量份的胰蛋白胨、5重量份的大豆蛋白胨、5重量份的酪蛋白胨、5重量份的氯化钠、15重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水；

步骤2)菌体增殖：将含所述菌苔的活化培养基加入到增殖培养基中，在50～60℃环境中，转速100～250rpm/min条件下培养12h；所述增殖培养基由以下重量份的材料组成：5～10重量份的胰蛋白胨、5～10重量份的大豆蛋白胨、5～10重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的氯化钠和1000重量份的蒸馏水；

步骤3)菌体筛选：在无菌平皿中加入筛选培养基，并在筛选培养基的表面覆盖无菌滤纸1～5张，将步骤2)所得菌液加到无菌滤纸上，在50～60℃下培养24h；所述筛选培养基由以下重量份的材料组成：1～5重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的酵母提取物、1～5重量份的牛肉浸膏、0.01～0.1重量份的KH₂PO₄、0.1～1重量份的MnSO₄·H₂O、0.1～1重量份的MgSO₄·2H₂O、0.01～1重量份的CaCl₂·2H₂O、10～20重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水；

步骤4)芽孢诱导：将步骤3)中的无菌滤纸放入产孢培养基中，在50～60℃环境中，转速100～200rpm/min条件下培养12h后，改变温度至30～50℃，继续培养12h，得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢；所述产孢培养基由以下重量份的材料组成：1～5重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的酵母提取物、0.01～0.1重量份的NaCl、0.1～1重量份的MnSO₄·H₂O、0.1～1重量份的MgSO₄·2H₂O、0.01～1重量份的CaCl₂·2H₂O、5～10重量份的PEG6000、0.5～5重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水。

优选的是，所述的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，在所述活化培养基、增殖培养基、筛选培养基和产孢培养基中用HCl或NaOH调节pH在7.0～7.3之间。

优选的是，所述的制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，所述增殖培养基由以下重量份的材料组成：7.5重量份的胰蛋白胨、7.5重量份的大豆蛋白胨、7.5重量份的酪蛋白胨、3重量份的氯化钠和1000重量份的蒸馏水。