[发明专利]用于甘薯病毒病实时荧光定量PCR检测的引物及检测方法有效
| 申请号： | 201510004529.5 | 申请日： | 2015-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN104450977A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 张凯;王季春;卢会翔;唐道彬;吕长文;赵勇;刘勋;黄远新 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 王贵君 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 甘薯 病毒 实时 荧光 定量 pcr 检测 引物 方法 | ||
1.用于甘薯病毒病实时荧光定量PCR的检测引物，其特征在于：所述检测引物包括甘薯褪绿矮化病毒SPCSV热激蛋白70基因和甘薯羽状斑驳病毒SPFMV外壳蛋白基因的检测引物，所述甘薯褪绿矮化病毒SPCSV热激蛋白70基因的检测引物如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示；所述甘薯羽状斑驳病毒SPFMV外壳蛋白基因的检测引物如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。
2.含有权利要求1所述检测引物的检测试剂盒。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒还包括内标基因检测引物，所述内标基因为甘薯泛素基因UBI和甘薯组蛋白H2B基因，所述甘薯泛素基因UBI的检测引物如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示；所述甘薯组蛋白H2B基因的检测引物如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示。
4.利用权利要求2或3所述检测试剂盒检测甘薯SPVD病毒病的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)提取检测样品和对照样品总RNA，反转合成第一链cDNA，备用；
(2)根据甘薯褪绿矮化病毒SPCSV热激蛋白70基因和甘薯羽状斑驳病毒SPFMV外壳蛋白基因设计荧光定量PCR的检测引物和内标基因检测引物，然后以步骤(1)合成的第一链cDNA为模板进行荧光定量PCR扩增；
(3)比对检测样品和对照样品的Ct值计算甘薯褪绿矮化病毒SPCSV热激蛋白70基因和甘薯羽状斑驳病毒SPFMV外壳蛋白基因的相对表达量。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述甘薯褪绿矮化病毒SPCSV热激蛋白70基因的检测引物如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示；所述甘薯羽状斑驳病毒SPFMV外壳蛋白基因的检测引物如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述内标基因为甘薯泛素基因UBI和甘薯组蛋白H2B基因。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述甘薯泛素基因UBI的检测引物如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示；所述甘薯组蛋白H2B基因的检测引物如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示。
8.根据权利要求4～7任一项所述的方法，其特征在于：所述荧光定量PCR的扩增程序为95℃预变性10min；95℃变性15s，60℃退火1min，50个热循环。
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