[发明专利]醋酸去氨加压素的固相制备工艺

权利要求书

1. 一种醋酸去氨加压素的固相制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、以替代度为1.6~2.0mmol/g的Am Resin树脂，溶胀、抽干为起始原料，偶联Fmoc Rink Amide AM-Linker，制得功能基载体；

步骤二、采用固相多肽逐步缩合法，根据肽序从C端至N端，首先将Fmoc-Gly-OH与步骤一Rink Amide-AM Resin偶联反应获得Fmoc-Gly-功能基载体；

步骤三、去除步骤二Fmoc-Gly-功能基载体的保护基Fmoc，从而获得H -Gly-功能基载体；

步骤四、根据肽序，按照Fmoc/tBu固相逐步合成策略，重复以上脱Fmoc保护和偶联操作步骤，从C端到N端开始再依次偶联Fmoc-D-Arg(pbf) -OH、 Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Cys(Trt) -OH、 Fmoc-Asn(Trt) -OH、 Fmoc-Gln(Trt) -OH、 Fmoc-Phe-OH、 Fmoc-Tyr(tBu) -OH、Mpr(Trt) -OH，期间依次脱去Fmoc-保护基团，直至完成线肽树脂的合成；

步骤五、在所述线肽树脂中加入I₂溶液，从而将线性肽树脂氧化成氧化型肽树脂，所述I₂溶液为将I₂溶解于由DMF、MeOH按照1：1体积比形成的溶剂中，所述I₂的量为线肽树脂的摩尔数的4~8倍；

步骤六、将所述氧化型肽树脂缓缓加入裂解液中，待全部加完后，再在室温裂解2h，待裂解时间结束后，将树脂滤掉得到含多肽的裂解液，所述裂解液由TFA、TIS、H₂O按照95：2~3：2~3体积份比例混合形成；

步骤七、将含多肽的裂解液缓缓加入到的冰乙醚中，析出白色的固体粗肽，静置后离心，并用冰的无水乙醚交替研磨洗涤、离心，所述粗品经真空干燥至恒重，得到干燥后的粗肽；

步骤八、将所述干燥后的粗肽采用乙腈：纯水=2：8的溶液溶解，借助制备型反相HPLC 纯化，收集目的产物，旋蒸，冻干得到醋酸去氨加压素成品。

2. 根据权利要求1所述的醋酸去氨加压素的固相制备工艺，其特性在于：所述步骤二和步骤四中Fmoc保护的氨基酸的投料量为与其进行的偶联的树脂的摩尔数的2～4倍。

3. 根据权利要求1所述的醋酸去氨加压素的固相制备工艺，其特征在于：所述步骤六中裂解液由TFA、TIS、H₂O按照95：2.5：2.5体积份比例混合形成。

4. 根据权利要求1所述的醋酸去氨加压素的固相制备工艺，其特征在于：所述步骤八中A相选择磷酸盐缓冲液，B相为磷酸盐缓冲液-乙腈。

5. 根据权利要求1所述的醋酸去氨加压素的固相制备工艺，其特征在于：所述步骤二和步骤四中采用DIC/HOBt缩合体系。

6. 根据权利要求1所述的醋酸去氨加压素的固相制备工艺，其特征在于：所述干燥后的粗肽的溶解浓度2.5~3.5mmol/L。