[发明专利]醋酸去氨加压素的固相制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及多肽药物化学合成领域，具体涉及一种醋酸去氨加压素的固相制备工艺。

背景技术

去氨加压素的氨基酸序列为：3-巯基丙氨酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-谷氨酰胺氨酰-L-天冬酰胺氨酰-L-半胱氨酰-L-脯氨酰-D-精氨酰-甘氨酰胺（1→6）环二硫化物，其结构如下：

去氨加压素为天然精氨盐加压素的结构类似物，系对天然激素的化学结构进行两处改动而得（即1位半胱氨酸脱去氨基和8位D-精氨酸取代L-精氨酸）。静脉或皮下给予去氨加压素0.3μg/kg体重，可使血浆中凝血因子VIII（VIII：C）的活力增加2~4倍；也使VonWillebrand因子抗原（VWF：AG）的含量增加，但强并稍小。

同时，释放出组织型纤维蛋白溶酶原激活因子（t-PA）。皮下注射的生物利用度约为静脉注射生物利用度的85%，按体重0.3μg/kg给药的最大血药浓度在给药后约60分钟达到峰值，平均值约为600pg/ml，血浆半衰期3-4小时，止血效果取决于血浆中VIII：C的半衰期，约8-12小时。去氧加压素能使因尿毒症、肝硬化、先天性或药源性血小板功能不良等，以及未知病因的出血时间过长患者的出血时缩短或正常化，IIB型血管性血友病患者身上的VIII因子异常，使用去氧加压素可引致血小板发生凝聚或血小板减少症。使用城乡差别氨加压素可避免因使用VIII因子浓缩物而导致爱滋病病毒或肝炎病毒传染的危险临床用于中枢性尿崩症、夜间遗尿及血友病等，也用于肾尿液浓缩功能的测试。

目前多肽化学合成去氨加压素主要有液相合成法和固相合成两种途径。液相法合成操作繁琐，每一个氨基酸偶联完成后都需要一步纯化过程，对合成人员的化学操作水平及设备要求都较高，且周期较长，合成结束后在碱性液相条件下氧化成二硫键。该方法一般适合于短肽的合成和大规模生产；而固相多肽合成法操作简便快捷，每步只需简单的洗涤树脂，就可以达到简单提纯的目的，合成周期相对较短，合成完成后，在液相或者固相条件下，氧化得粗品，经液相反相制备得去氨加压素精肽。固相法尤其适用于中长肽的合成，而且易于放大生产。本发明拟在常规固相合成法基础上，加以改善优化。WO2011011342公开了一种分别在MBHA、Sieber 和CTC树脂上合成醋酸去氨加压素的方法，该方法采用碘/二氯甲烷进行固相环化，其中CTC树脂固相环化、裂解得到碳端为羧基的去氨加压素前体，再进行氨化得到醋酸去氨加压素，通过三种树脂和不同方法合成所得产品的纯度都低于90%。US5726287公开了一种分别采用Boc法（MBHA树脂）和Fmoc法（AM树脂）合成醋酸去氨加压素的方法，具体步骤为：先合成醋酸去氨加压素线性肽，然后在水相体系和碘氧化条件下进行环化生成二硫键，最后分别采用离子交换填料和反相HPLC进行了纯化，产品纯度都低于95%。CN101372505公开了一种采用Sieber Amide树脂固相合成醋酸去氨加压素的方法，其通过逐步偶联法合成去氨加压素线性肽树脂后，在乙腈/水体系中用双氧水对线性肽进行氧化生成去氨加压素肽树脂，再经过裂解、纯化得到醋酸去氨加压素，其收率为55%，产品纯度未见报道。但Sieber Amide树脂是一种非常特殊的树脂，供应商很少，不易采购，且售价高昂。专利CN102863513以Rink Amide AM 树脂为起始树脂进行了去氨加压素的Fmoc法合成，合成线性肽肽树脂并裂解后，再通过线性肽的液相双氧水氧化生成二硫键，未报到收率和产品纯度。

专利CN103102395采用Sieber  Amide 树脂合成去氨加压素线性肽，裂解得到线性肽粗肽并经过纯化后，再于水相中进行氧化反应生成去氨加压素，最后经转盐得到醋酸去氨加压素，纯度99.5%以上，收率可达52%。同样存中其原料Sieber Amide 树脂价格昂贵和供应商少的缺点。CN201310412013针对以上各项目的缺点，采用AM树脂作为载体，常规固相法合成线肽后，使用含1%TFA的DCM溶液去除Cys(Trt)和Mpa(Trt)上的保护基Trt，接着加氧化试剂固环得到环肽树脂，最后经裂解得到去氨加压素。经制备纯化，线肽纯度可达97%以上，收率高于65%，但该方法未阐述树脂使用Rink Amide AM Resin，价格同样偏高，且在固相环化前，增加一步1%TFA的DCM溶液去除Cys(Trt)和Mpa(Trt)上的保护基Trt，由于TFA为树脂裂解试剂，所以该步骤较大程度的提高了肽链从树脂上掉落的可能，不利于工艺稳定和收率提高。

发明内容