[发明专利]血清3型鸭甲型肝炎病毒活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种血清3型鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus,DHAV-3)弱毒HuB60株，该毒株已于2015年01月06日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC No.10307。

2.如权利要求1所述血清3型鸭甲型肝炎病毒DHAV-3HuB60株(CGMCC No.10307株)是通过鸡胚传代培养获得的弱毒株。

3.如权利要求2所述DHAV-3的鸡胚培养方法，包括以下步骤：

(1)选取经抗DHAV-1阳性血清和抗DHAV-3阳性血清在鸭胚上进行中和试验和交叉中和试验，确诊为DHAV-3感染的肝脏组织病料用于鸡胚培养分离病毒；

(2)DHAV-3的组织病料的处理：取少许DHAV-3的肝脏组织，用灭菌生理盐水做1:5(W/V)左右稀释、研磨、冻融2～3次、离心，取离心上清液经0.22μm滤器除菌过滤；

(3)鸡胚接种分离病毒：取上述无菌滤液通过卵黄囊接种途径接种6～8日龄SPF鸡胚，每只胚接种0.2～0.5ml,37℃培养，24h内死胚弃之，连续观察至120h，其间若有鸡胚死亡，随时取出置2～8℃冰箱冷藏数小时或过夜；若无死亡，则于72～96h随机取3枚胚置2～8℃冷藏过夜；

(4)鸡胚传代培养：及时取出胚体，研磨成匀浆、离心取上清液经0.22μm除菌过滤，取滤液经卵黄囊接种6～8日龄SPF鸡胚5～10枚，每只胚0.2～0.5ml；盲传5～10代，随着传代次数的增加，鸡胚死亡时间前移，鸡胚死亡率也逐渐达到100％，表明通过鸡胚分离病毒成功，并逐渐适应鸡胚培养。

4.一种疫苗组合物，其特征在于包含活的如权利要求1所述的DHAV-3弱毒株(如HuB60株，即CGMCC No.10307株)和兽用生物制品可接受的冻干保护剂。

5.一种疫苗组合物，其特征在于包含活的如权利要求1所述的DHAV-3弱毒株(如HuB60株，即CGMCC No.10307株)、DHAV-1弱毒株(如A66株)和兽用生物制品可接受的冻干保护剂。

6.如权利要求3所述DHAV-1弱毒株A66株，该毒株已于2013年08月13日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.8020。