[发明专利]桑树类黄酮3‑O‑糖基转移酶基因、蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种核酸分子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或其互补序列。

2.如权利要求1所述的核酸分子，其扩增引物为：

UFGT-F：5'>CCGGAATTCATGGCACCATCACCACCTTGCC<3'，

UFGT-R：5'> GAAAGCGGCCGCTATCAGTCTTACAACTCCTT <3'。

3.一种蛋白分子，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

4.一种载体，包含了权利要求1或2所述核酸分子。

5.如权利要求4所述的载体，其结构如图3所示。

6. 如权利要求4所述的载体，其核苷酸序列为SEQ ID NO.3。

7.一种桑树类黄酮3-O-糖基转移酶蛋白的制备方法，包括获取权利要求1所述的核酸分子为目的基因，构建包含目的基因的载体，载体导入宿主菌，从宿主菌中获取目的蛋白、目的蛋白纯化，目的蛋白复性，所述目的蛋白复性是将纯化后的蛋白液依次用透析液I、II、III、Ⅳ、V、Ⅵ、Ⅶ透析，每种透析液透析4-8h；

透析液I配方：100mM Tris.HCl，l0mM EDTA，0.5％SDS，6M尿素，5%甘油，2mM β-巯基乙醇(pH8.0)；

透析液II配方：100mM Tris.HCl，10mM EDTA，0.5％SDS，4M尿素，5%甘油，2mM β-巯基乙醇(pH8.0)；

透析液III配方：100mM Tris.HCl，10mM EDTA，0.5％SDS，2M尿素，5%甘油，2mM β-巯基乙醇(pH8.0)；

透析液IV配方：100mM Tris.HCl，10mM EDTA，0.1％SDS，1M尿素，5%甘油，2mM β-巯基乙醇(pH8.0)；

透析液V配方：100mM Tris.HCI，l0mM EDTA，0.1％SDS，5%甘油，2mM β-巯基乙醇(pH8.0)；

透析液VI配方：50mM Tris.HCl，5mM EDTA，5%甘油，2mM β-巯基乙醇(pH8.0)；

透析液VII配方：20mM Tris.HCl，2mM EDTA，5%甘油，2mM β-巯基乙醇(pH8.0)。

8.如权利要求7所述的桑树类黄酮3-O-糖基转移酶蛋白的制备方法，所述载体导入宿主菌后蛋白纯化前，加入终浓度为0.4 mmol/L 的IPTG，28℃培养4h。