[发明专利]一种重组链霉菌、其构建方法及提高抗生素产量的方法有效
申请号: | 201510007574.6 | 申请日: | 2015-01-08 |
公开(公告)号: | CN104531598B | 公开(公告)日: | 2018-01-16 |
发明(设计)人: | 张立新;刘钇君;刘梅;朱华;张庆;高鹤永;刘新利;帅辉;唐丹 | 申请(专利权)人: | 齐鲁工业大学;中国科学院微生物研究所 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/76;C12N15/60;C12P19/62;C12R1/465 |
代理公司: | 北京律和信知识产权代理事务所(普通合伙)11446 | 代理人: | 王美石,刘国伟 |
地址: | 250353 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 重组 霉菌 构建 方法 提高 抗生素 产量 | ||
1.一种重组链霉菌,所述重组链霉菌为阿维菌素链霉菌(Streptomyces avermitilis)AV-2320-8,其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC 10146。
2.一种构建权利要求1所述的重组链霉菌的方法,包括在出发链霉菌中过表达序列表的氨基酸序列2所示的乙酰乳酸合酶小亚基ilvH,所述出发链霉菌为阿维菌素链霉菌(Streptomyces avermitilis)MA4680。
3.根据权利要求2所述的方法,其中通过将编码所述乙酰乳酸合酶小亚基的ilvH基因克隆到表达载体大肠杆菌-链霉菌穿梭载体pSET152,再将得到的重组表达载体引入到出发链霉菌获得所述重组链霉菌。
4.根据权利要求3所述方法,其中,将表达载体转化到限制修饰作用缺陷的大肠杆菌ET12567 pUZ8002中,收集抗性菌落再与所述出发链霉菌做结合转移。
5.根据权利要求3所述方法,其中所述ilvH基因是序列表中的核苷酸序列1所示的阿维菌素链霉菌中编码乙酰乳酸合酶小亚基的ilvH基因,启动子为序列表中的核苷酸序列3所示的红霉素抗性基因强启动子ermE*p。
6.一种提高链霉菌中以L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸为前体进行次级代谢的产物产量的方法,所述方法包括利用权利要求1所述的重组链霉菌进行发酵的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述以L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸为前体进行次级代谢的产物是阿维菌素。
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