[发明专利]一种用于MALDI‑TOFMS检测的植物线虫前处理方法

权利要求书

1.一种用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法，其特征在于，所述植物线虫前处理方法是针对单条植物线虫进行的处理，包括如下步骤：

(1)在灭菌的载玻片上滴加5-8μl的提取液；

(2)在体视显微镜下将清洗好的所述单条植物线虫转移到所述载玻片上的提取液中，并压破所述单条植物线虫，所述提取液用于提取所述单条植物线虫的蛋白质并将所述蛋白质水解为多肽；

(3)在体视显微镜下，用移液枪吸取步骤(2)中的提取液并连带压破的植物线虫一起滴加在样品板上，并晾干；

(4)在晾干后的样品板上加1-1.5μl的基质溶液，使所述多肽分散在所述基质溶液中，并晾干得到用于MALDI-TOF MS检测的样品。

2.如权利要求1所述的用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法，其特征在于：所述提取液选自以下群组中的一种：

三氟乙酸和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中，三氟乙酸的体积浓度为0.1-0.5％，余量为灭菌水；

乙醇和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中，乙醇的体积浓度为90-95％，余量为灭菌水；

丙酮和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中，丙酮的体积浓度为90-95％，余量为灭菌水；甲酸、乙腈和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中所述甲酸的体积浓度为33-37％，所述乙腈的体积浓度是48-52％，余量为灭菌水；

甲酸、异丙醇和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中所述甲酸的体积浓度为17-22％，所述异丙醇的体积浓度是33-35％，余量为灭菌水。

3.如权利要求1所述的用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法，其特征在于：步骤(4)中的所述基质溶液是由以下形成：将适用于多肽的基质加入一溶剂中直到所述基质过饱和。

4.如权利要求3所述的用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法，其特征在于：所述基质为α-氰基-4-羟基肉桂酸、芥子酸、阿魏酸、2-(4-羟基亚胺)苯甲酸和5-氯-2-巯基苯丙噻唑中的一种。

5.如权利要求3所述的用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法，其特征在于：所述溶剂选自以下群组中的一种：

乙腈、三氟乙酸和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中乙腈的体积浓度为33-50％，三氟乙酸的体积浓度为2.5-3.3％，余量为灭菌水；

乙醇和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中乙醇的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

甲醇和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中甲醇的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

乙腈和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中乙腈的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

四氢呋喃和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中四氢呋喃的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

丙酮和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中丙酮的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水。

6.如权利要求1所述的用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法，其特征在于：在所述步骤(1)之前还包括清洗步骤：将所述植物线虫转移到离心管中，加入1-1.2mL灭菌水，涡旋5-8min，4000-5000rpm离心5-10min，去上清液；然后加入1-1.2mL灭菌水，涡旋5-8min，4000-5000rpm离心5-10min，去上清液；再加入1-1.2mL灭菌水，涡旋5-8min，4000-5000rpm离心5-10min，去上清液；最后加1-1.2mL灭菌水，备用。