[发明专利]一种用于MALDI‑TOFMS检测的植物线虫前处理方法

说明书

技术领域

本发明属于质谱分析技术领域，特别是涉及一种用于MALDI-TOF MS(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry的缩写，中文全称为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)检测的植物线虫前处理方法。

背景技术

MALDI-TOF MS仪器主要由两部分组成：基质辅助激光解吸电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测。MALDI-TOF-MS具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点，为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段。近年来，该技术逐渐被用于植物细菌、真菌和线虫的检测当中。但检测前对植物线虫的前处理方法很难操作，使得到的结果稳定性差、背景信号多而杂、灵敏度低从而影响对植物线虫的检测。

发明内容

为了弥补上述现有技术的不足，本发明提出一种用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法。

本发明的技术问题通过以下的技术方案予以解决：

一种用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法，包括如下步骤：

(1)在灭菌的载片上滴加提取液，所述提取液的滴加量为每条所述植物线虫滴加5-8μl；

(2)在体视显微镜下将清洗好的所述植物线虫转移到所述载片上的提取液中，并压破所述植物线虫，所述提取液用于提取所述植物线虫的蛋白质并将所述蛋白质降解为多肽；

(3)在体视显微镜下，用移液枪吸取步骤(2)中的提取液并连带压破的植物线虫一起滴加在样品板上，并晾干；

(4)在晾干后的样品板上加基质溶液，使所述多肽分散在所述基质溶液中，并晾干得到用于MALDI-TOF MS检测的样品，每条所述植物线虫加1-1.5μl的所述基质溶液。

优选地，所述提取液选自以下群组中的一种：

三氟乙酸和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中，三氟乙酸的体积浓度为0.1-0.5％，余量为灭菌水；

乙醇和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中，乙醇的体积浓度为90-95％，余量为灭菌水；

丙酮和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中，丙酮的体积浓度为90-95％，余量为灭菌水；

甲酸、乙腈和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中所述甲酸的体积浓度为33-37％，所述乙腈的体积浓度是48-52％，余量为灭菌水；

甲酸、异丙醇和灭菌水的混合溶液，在该混合溶液中所述甲酸的体积浓度为17-22％，所述异丙醇的体积浓度是33-35％，余量为灭菌水。

优选地，步骤(4)中的所述基质溶液是由以下形成：将适用于多肽的基质加入一溶剂中直到所述基质过饱和。

进一步优选地，所述基质为α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-cyano-4-hydroxycinnamicacid,CHCA)、芥子酸(sinapinic acid)、阿魏酸(Ferulic Acid)、2-(4-羟基亚胺)苯甲酸(2-(4-hydroxyphenylazo)benzoic acid,HABA)、5-氯-2-巯基苯丙噻唑(5-chloro-2-mercaptobenzothiazo1e,CMBT)。

进一步优选地，所述溶剂选自以下群组中的一种：

乙腈、三氟乙酸和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中乙腈的体积浓度为33-50％，三氟乙酸的体积浓度为2.5-3.3％，余量为灭菌水；

乙醇和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中乙醇的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

甲醇和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中甲醇的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

乙腈和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中乙腈的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

四氢呋喃和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中四氢呋喃的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水；

丙酮和灭菌水的混合溶剂，在该混合溶剂中丙酮的体积浓度为45-55％，余量为灭菌水。