[发明专利]一种血小板抗体检测的免疫纳米磁珠酶联免疫检测方法

权利要求书

1.一种血小板抗体检测的免疫纳米磁珠酶联免疫检测方法，其特征在于，包括步骤为：（1）将磁化血小板与待检样本混合反应；（2）用磁力分离步骤（1）中已反应的磁化血小板并洗涤；（3）加入酶标抗人二抗反应；（4）加入底物显色并终止反应，得到检测结果。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述磁化血小板是免疫纳米磁珠通过抗人血小板单克隆抗体与血小板结合得到的。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述免疫纳米磁珠的制备过程为：在Fe₃O₄纳米磁性颗粒表面包覆SiO₂层得到Fe₃O₄@SiO₂微球，通过硅烷化反应对Fe₃O₄@SiO₂微球的表面修饰氨丙基三甲氧基硅烷（NH₂-CH₂-CH₂-CH₂-Si(OCH₃)₃、APS）得到免疫纳米磁珠，所述Fe₃O₄纳米磁性颗粒是通过高温热解法合成的，所述Fe₃O₄纳米磁性颗粒的大小为50-200nm且是饱和磁化强度。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述磁化血小板的浓度为100~200×10⁹/L，加样体积为50~100μL。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述待检样本为患者的血清或血浆，加样体积为50~100μL。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述磁力为磁棒或磁粒板所具有的磁力，所述洗涤是用含体积分数为0.03~0.06% 的Tween-20的磷酸盐缓冲液（PBST）洗涤。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述酶标抗人二抗为羊抗人IgG、兔抗人IgG或鸡抗人IgG，所述酶标抗人二抗中采用的标记物为辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述酶标抗人二抗中采用的标记物为碱性磷酸酶，所述碱性磷酸酶是通过戊二醛法或过碘酸法交联在抗人二抗Fc段得到的。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（4）中所述显色用的底物为0.5~1.5mg/mL的4-硝基苯磷酸二钠（PNPP），所述终止采用的终止液为2~3mol/L 的NaOH溶液，所述检测结果的测定为：终止反应后，测定OD值，根据公式临界值（C.O.）= 阴性对照平均 A 值＋0.09判定，若待检样本A 值≥临界值（C.O.）为血小板抗体阳性，待检样本A 值＜临界值（C.O.）为血小板抗体阴性。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）至（4）中反应条件为在37℃下反应30~40min。