[发明专利]鉴定小麦新矮秆主效QTL的分子标记的引物对、方法及应用

权利要求书

1.一种鉴定小麦新矮秆主效QTL的分子标记的引物对，其特征在于，包括以下引物对中的一对或几对：

WGGC6079：正向引物：5’-ATGGAGGTTTGGGATCAGCA-3’(SEQ ID NO.1)，反向引物：5’-ACTATGGTACACTCGTGCGT-3’(SEQ ID NO.2)；

WGGC6880：正向引物：5’-CTTGCTGAGCTTGGTGGT-3’(SEQ ID NO.3)，反向引物：5’-TTGTTGCTGCACCATTACCC-3’(SEQ ID NO.4)；

WGGC8307：正向引物：5’-CTTTGCCGTCAACGGCCA-3’(SEQ ID NO.5)，反向引物：5’-TACGTGGAGAGCAGCACTAC-3’(SEQ ID NO.6)；

WGGC6073：正向引物：5’-CACAAGTACAAGGACCGCAG-3’(SEQ ID NO.7)，反向引物：5’-CAACAATCTCCATTTGCTTCTGA-3’(SEQ ID NO.8)。

2.一种鉴定小麦新矮秆主效QTL分子标记的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以所鉴定小麦材料的DNA为模板，利用权利要求1所述的引物对所述模板进行PCR扩增；PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测，若检测结果为能扩增出与小麦品种北农6号DNA片段相同大小的DNA片段，则确定所鉴定小麦材料中含有新矮秆主效QTL的QPh-2A.2。

3.根据权利要求2所述的鉴定小麦新矮秆主效QTL的分子标记的方法，其特征在于，所述新矮秆主效QTL的QPh-2A.2来源于小麦品种北农6号，位于小麦2A染色体长臂上。

4.根据权利要求2或3所述的鉴定小麦新矮秆主效QTL的分子标记的方法，其特征在于，

所述分子标记WGGC6079的引物对，对所鉴定小麦材料DNA进行PCR扩增后，电泳能检测到与小麦品种北农6号相同大小的DNA片段,该DNA片段与QPh-2A.2之间遗传距离为0cM；

所述述分子标记WGGC6880的引物对，对所鉴定小麦材料DNA进行PCR扩增后，电泳能检测到与小麦品种北农6号相同大小的DNA片段,该DNA片段与QPh-2A.2之间遗传距离为0cM；

所述分子标记WGGC8307的引物对，对所鉴定小麦材料DNA进行PCR扩增后，电泳能检测到与小麦品种北农6号相同大小的DNA片段,该DNA片段与QPh-2A.2之间遗传距离为1.7cM；

所述分子标记WGGC6073的引物对，对所鉴定小麦材料DNA进行PCR扩增后，电泳能检测到与小麦品种北农6号相同大小的DNA片段,该DNA片段与QPh-2A.2之间遗传距离为3.0cM。

5.根据权利要求2或3所述的鉴定小麦新矮秆主效QTL的分子标记的方法，其特征在于，所述PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测为：

(1)PCR扩增体系为：反应体系为10μL，包含10×buffer 1μL，15mmol L^-1MgCl₂1μL，2mmol L^-1dNTP 1μL，20ngμL^-1引物1μL，1U Taq酶，ddH₂O 4μL，20ngμL^-1基因组DNA 2μL；

(2)PCR扩增程序为：94℃预变性5min；然后94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸1.5min，40个循环；最后72℃后延伸10min；

(3)扩增产物的检测为：扩增产物加入3μL上样缓冲液形成检测样品，所述上样缓冲液含质量浓度为98％的甲酰胺，10mmol L^-1EDTA,pH为8.0,质量浓度为0.25％的溴酚蓝和质量浓度为0.25％的二甲苯青；取3μL所述检测样品在8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上以恒定电压100～150V，电泳3.5～4.5小时，经硝酸银染色后进行带型统计或扫描记录。

6.一种权利要求1所述的鉴定小麦新矮秆主效QTL的分子标记的引物对在小麦新矮秆分子标记辅助育种中的应用。

7.一种权利要求1所述的鉴定小麦新矮秆主效QTL的分子标记的引物对在制作小麦新矮秆材料中的应用。