[发明专利]快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法

权利要求书

1.快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)PDA培养基制作

将马铃薯洗净去皮，切成小块放入锅中加水小火煮沸0.5小时，用双层纱布过滤，在滤液中加、琼脂和葡萄糖，加水定容，马铃薯:葡萄糖:琼脂:蒸馏水添加的比例为200g:20g:12g:1000mL；趁热分装在试管或三角瓶中，121℃灭菌30分钟，制成PDA培养基；

(2)轮纹病菌培养

在超净工作台上将轮纹病菌接种到上述PDA培养基上，25℃条件下在光照培养箱里培养，待菌丝长满培养皿后得到轮纹病培养基菌落，用于叶片接种；

(3)叶片选取

选取拟鉴定品种或砧木新梢顶端下第5-6片成熟、完全展开且无病虫害叶片为鉴定材料，重复6次；

(4)叶片接种

将选取的待鉴定叶片用无菌水冲洗后晾干，用灭菌脱脂棉包裹叶柄基部,滴上无菌水保湿备用；用接种针刺伤叶片正面，用直径5mm打孔器从轮纹病培养基菌落边缘等径取下生长均一的圆形菌饼，将着生菌丝面的中心置于叶片刺伤部位；

(5)带菌叶片培养

在托盘底部铺上滤纸，在托盘内加入托盘高度约三分之一的水，在托盘内放置条形泡沫，将接种后的叶片放置于托盘内,使包裹着脱脂棉的叶柄浸于无菌水中，叶片架于条形泡沫上，托盘口覆上保鲜膜,置于培养箱中进行黑暗培养，培养条件温度为25℃，湿度为100％；

(6)抗性鉴定

在培养第6天，采用十字交叉法测量叶片病斑直径，用病斑横径与纵径乘积表示病斑面积，叶片的病斑面积与已知抗性等级材料的病斑面积对比，确定鉴定品种或砧木抗性等级。

2.根据权利要求1所述的快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法，其特征在于：已知抗性等级材料为鸡冠的病斑面积，标准病斑面积为8.5mm²。