[发明专利]快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种轮纹病菌抗性鉴定方法，具体为快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法。

背景技术

目前有关苹果枝干对轮纹病抗性鉴定与评价的方法多采用田间枝条接种、调查发病等级并计算病情指数的方法，该方法所需枝条量多、发病周期长、田间工作量大、且受自然环境条件影响较大，导致抗性鉴定用时长、鉴定方法繁琐、鉴定效果重复性较差，且易造成田间病害传播扩散。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种轮纹病抗性鉴定的方法，使苹果品种或砧木对轮纹病抗性的鉴定简单、用时短、鉴定结果重复性好，具体技术方案为：

快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法，包括以下步骤：

(1)PDA培养基制作

将马铃薯洗净去皮，切成小块放入锅中加水小火煮沸0.5小时，用双层纱布过滤，在滤液中加、琼脂和葡萄糖，加水定容，马铃薯:葡萄糖:琼脂:蒸馏水添加的比例为200g:20g:12g:1000mL；趁热分装在试管或三角瓶中，121℃灭菌30分钟，制成PDA培养基；

(2)轮纹病菌培养

在超净工作台上将轮纹病菌接种到上述PDA培养基上，25℃条件下在光照培养箱里培养，待菌丝长满培养皿后得到轮纹病培养基菌落，用于叶片接种；

(3)叶片选取

选取拟鉴定品种或砧木新梢顶端下第5-6片成熟、完全展开且无病虫害叶片为鉴定材料，重复6次；

(4)叶片接种

将选取的待鉴定叶片用无菌水冲洗后晾干，用灭菌脱脂棉包裹叶柄基部,滴上无菌水保湿备用；用接种针刺伤叶片正面，用直径5mm打孔器从轮纹病培养基菌落边缘等径取下生长均一的圆形菌饼，将着生菌丝面中心置于叶片刺伤部位；

(5)带菌叶片培养

在托盘底部铺上滤纸，在托盘内加入托盘高度约三分之一的水，在托盘内放置条形泡沫，将接种后的叶片放置于托盘内,使包裹着脱脂棉的叶柄浸于无菌水中，叶片架于条形泡沫上，托盘口覆上保鲜膜,置于培养箱中进行黑暗培养，培养条件温度为25℃，湿度为100％；

(6)抗性鉴定

在培养第6天，采用十字交叉法测量叶片病斑直径，用病斑横径与纵径乘积表示病斑面积，叶片的病斑面积与已知抗性等级材料的病斑面积对比，确定待鉴定品种或砧木对枝干轮纹病的抗性等级。

其中已知抗性等级材料为鸡冠的病斑面积，标准病斑面积为8.5mm²，确定叶片所属的待鉴定品种或砧木对枝干轮纹病的抗性等级，具体的标准为：

X＝叶片病斑面积/8.5mm²。

X<1.1，表示待鉴定品种或砧木高抗枝干轮纹病；

1.1≤X<1.3，表示待鉴定品种或砧木中抗枝干轮纹病；

1.3≤X<1.7，表示待鉴定品种或砧木中感枝干轮纹病；

X≥1.7，表示待鉴定品种或砧木高感枝干轮纹病。

本发明提供的快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法，将叶片接种、创造适宜轮纹病菌感染条件，对感染结果进行轮纹病抗性鉴定；鉴定所需材料少、用时短，可重复性高，鉴定方法简单易掌握，成本低、易推广。

具体实施方式

结合实施例说明本发明的具体实施方式。

6月-7月份两次对不同的苹果品种和砧木材料取样，用本发明方法进行了抗性鉴定，所选苹果品种和砧木均为已近通过田间枝干接种轮纹病鉴定的不同抗性材料，其鉴定标准参照阎振立对抗病性等级划分的方法对病情指数进行划分，高度抗病等级(0.00％-10.00％)；中度抗病等级(10.01％-25.00％)；中度感病等级(25.01％-40.00％)；高度感病等级(＞40.01％)。

快速鉴定苹果枝干对轮纹病菌抗性的方法，包括以下步骤：

(1)PDA培养基制作

将马铃薯洗净去皮，切成小块放入锅中加水小火煮沸0.5小时，用双层纱布过滤，在滤液中加、琼脂和葡萄糖，加水定容，马铃薯:葡萄糖:琼脂:蒸馏水添加的比例为200g:20g:12g:1000mL；趁热分装在试管或三角瓶中，121℃灭菌30分钟，制成PDA培养基；

(2)轮纹病菌培养

在超净工作台上将轮纹病菌接种到上述PDA培养基上，25℃条件下在光照培养箱里培养，待菌丝长满培养皿后得到轮纹病培养基菌落，用于叶片接种；

(3)叶片选取