[发明专利]采用Taqman探针法鉴定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn)的方法及试剂盒

权利要求书

1.用于鉴定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn)的Taqman探针法，包括如下步骤：

(1)获得TCK阳性质粒标准品的实时定量标准曲线，其中Ct值为纵坐标，起始模板拷贝数为横坐标；

(2)提取待测样品的DNA；

(3)以所述待测样品的DNA为模板进行实时定量PCR反应，

(4)根据所述实时定量PCR反应获得的Ct值以及所述实时定量标准曲线得到所述待测样品中TCK的拷贝数；

其特征在于：所述实时定量PCR反应采用的引物及探针如下：

上游引物ACGACCGACTTTCCGAGAGC，

下游引物GTGTGGGACGAAGGCATCAA；

Taqman探针FAM 5'-ACGACTTGCGGTCCCTCCACA-3'TAMAR。

2.根据权利要求1所述的Taqman探针法，所述实时荧光定量PCR反应的体系如下：

加入灭菌蒸馏水至20μl。

3.根据权利要求1所述的Taqman探针法，所述实时荧光定量PCR反应的体系程序如下：95℃10分钟，95℃15秒，60℃60秒，40个循环。

4.用于鉴定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn)的Taqman探针法试剂盒，其特征在于：包括除DNA模板之外的用于实时荧光定量PCR反应的试剂和标准曲线方程说明书；

所述试剂中的引物如下：

上游引物ACGACCGACTTTCCGAGAGC，

下游引物GTGTGGGACGAAGGCATCAA；

Taqman探针：FAM 5'-ACGACTTGCGGTCCCTCCACA-3'TAMAR。

所述标准曲线方程为TCK阳性质粒标准品的实时定量标准曲线的方程，所述标准曲线的纵坐标为Ct值，横坐标为所述TCK阳性质粒标准品的起始模板拷贝数。