[发明专利]产生非节段负链RNA 病毒的细胞和方法

权利要求书

1.一种稳定产生至少RNA聚合酶、非节段负链RNA病毒核蛋白(N)和非节段负链RNA病毒磷蛋白(P)或它们的功能衍生物的细胞。

2.如权利要求1所述的细胞，其中所述稳定产生不是由药物选择引起的。

3.如权利要求1或2所述的细胞，其基因组中整合有：

a.至少一个拷贝的处于转录调控元件控制下编码RNA聚合酶的核酸，

b.至少一个拷贝的处于转录调控元件控制下编码非节段负链RNA病毒N蛋白的核酸，以及

c.至少一个拷贝的处于转录调控元件控制下编码非节段负链RNA病毒P蛋白的核酸。

4.如权利要求1至3任一项所述的细胞，其还包含整合到其基因组中的至少一个拷贝的DNA瓣(DNA flap)，其中所述至少一个DNA瓣与所述核酸功能相关。

5.一种可通过其基因组与下列载体重组而得到的细胞：

a.包含DNA瓣和至少一个拷贝的编码RNA聚合酶的核酸的表达载体，

b.包含DNA瓣和至少一个拷贝的编码非节段负链RNA病毒N蛋白的核酸的表达载体，以及

c.包含DNA瓣和至少一个拷贝的编码非节段负链RNA病毒P蛋白的核酸的表达载体。

6.一种可通过其基因组与包含下列核酸的表达载体重组而得到的细胞：

a.至少一个拷贝的编码RNA聚合酶的核酸，

b.至少一个拷贝的编码非节段负链RNA病毒N蛋白的核酸，

c.至少一个拷贝的编码非节段负链RNA病毒P蛋白的核酸，以及

d.DNA瓣。

7.如权利要求1至6任一项所述的细胞，其中非节段负链RNA病毒N蛋白和P蛋白来自相同的病毒。

8.如权利要求7所述的细胞，其中所述N蛋白和P蛋白来自相同的病毒株或不同的病毒株。

9.如权利要求1至6所述的细胞，其中非节段负链RNA病毒的N蛋白和P蛋白来自不同的非节段负链RNA病毒。

10.如权利要求8所述的细胞，其中非节段负链RNA病毒的N蛋白和P蛋白来自减毒的MV病毒，特别是Schwarz MV株。

11.如权利要求1至10任一项所述的细胞，其中所述RNA聚合酶是T7噬菌体RNA聚合酶或其核形式(nlsT7)。

12.如权利要求1至11任一项所述的细胞，其中所述DNA瓣源自反转录病毒。

13.如权利要求12所述的细胞，其中所述DNA瓣源自慢病毒，特别是人慢病毒。

14.如权利要求13所述的细胞，其中所述DNA瓣源自HIV、CAEV、EIAV、VISNA、SIV或FIV病毒。

15.如权利要求14所述的细胞，其中所述DNA瓣源自HIV-1或HIV-2。

16.如权利要求5至15任一项所述的细胞，其中所述载体是源自HIV的基因转移载体，其包含两个LTR、表达调控元件和转录调控元件，其中一个LTR任选地缺失U3部分。

17.如权利要求5或权利要求7至16任一项所述的细胞，其中所述载体是：

a.2006年12月14日以编号I-3702保藏在CNCM的质粒HIV-1-TRIPΔU3.CMV-T7或2006年12月14日以编号I-3703保藏在CNCM的质粒HIV-1-TRIPΔU3.CMV-nlsT7，

b.2006年12月14日以编号I-3700保藏在CNCM的质粒HIV-1-TRIPΔU3.CMV-N，以及

c.2006年12月14日以编号I-3701保藏在CNCM的质粒HIV-1-TRIPΔU3.CMV-P。

18.如权利要求1至17任一项所述的细胞，其是真核细胞。

19.如权利要求18所述的细胞，其是哺乳动物细胞。

20.如权利要求19所述的细胞，其是人细胞。

21.如权利要求1至20任一项所述的细胞，其可分裂。

22.如权利要求1至21任一项所述的细胞，其是HEK 293(人胚肾)细胞。