[发明专利]高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法

权利要求书

1.一种高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：将一端用荧光素FAM修饰另一端用氨基修饰的DNA通过共价键与磁性微球表面固定，得到固定化DNA；

步骤(2)：向所述的固定化DNA中加入药物的溶液，得到具有药物的DNA；

步骤(3)：将所述的具有药物的DNA进行体外染毒，得到染毒DNA；

步骤(4)：将所述的染毒DNA进行磁性分离，分离掉染毒成分和反应杂质，保留未断链DNA；

步骤(5)：向所述的未断链DNA中加入酶标FAM抗体，所述的酶标FAM抗体与未断链DNA自由端的FAM发生免疫反应，得到免疫反应后的DNA；

步骤(6)：向所述的免疫反应后的DNA中加入发光底物后，采用高灵敏度化学发光法检测所述的免疫反应后的DNA，得到检测信号；

步骤(7)：将所述的检测信号与对照组信号进行对比，判断所述的药物是否保护DNA。

2.根据权利要求1所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，所述的步骤(1)具体包括以下步骤：

步骤(1.1)：将磁性微球采用羧基修饰，取羧基修饰后的磁性微球用咪唑缓冲液磁性分离法洗涤3次后，分散在溶有EDC的咪唑缓冲液中，37℃恒温振荡20min，得到带有磁性微球的溶液；

步骤(1.2)：向所述的带有磁性微球的溶液中加入一端用荧光素FAM修饰另一端用氨基修饰的DNA，继续37℃恒温振荡60min后得到固定化DNA，用洗涤液洗涤三次后使所述的固定化DNA分散在洗涤液中。

3.根据权利要求1所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，所述的药物溶液通过浓度为1mg/ml的药物储备液采用含有0.1％吐温的PBS反应液溶液稀释后得到。

4.根据权利要求1所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，所述的体外染毒通过采用Fenton型产羟自由基体系、黄嘌呤/黄嘌呤酶产超氧阴离子体系、次氯酸钠/过氧化氢产单线态氧体系、体外模拟吸烟、石棉、氧化不饱和脂肪酸、PM2.5、化学致癌物或N-亚硝基-乙胺进行。

5.根据权利要求4所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，当体外染毒通过采用所述的Fenton型产羟自由基体系时，Fe²⁺的浓度为0.225～1.8mM,Fe²⁺/EDTA/H₂O₂的摩尔比为1:3:60。

6.根据权利要求4所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，当体外染毒通过采用体外模拟吸烟时，为将含有所述的具有药物的DNA的气体捕集器与自动吸烟机的烟道串联，所述的自动吸烟机按联邦贸易委员会协议标准吸烟。

7.根据权利要求1所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，磁性分离掉染毒成分和反应杂质后，在未断链DNA中加入0.02％BSA封闭液封闭，所述的封闭液用PBS配置。

8.根据权利要求1所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，所述的酶标FAM抗体为HRP标记的兔抗体。

9.根据权利要求8所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，所述的HRP标记的兔抗体的稀释倍数为10000倍。

10.根据权利要求1所述的高效筛选DNA断链损伤保护性药物的方法，其特征在于，所述的步骤5具体包括以下步骤：

步骤(5.1)：向所述的未断链DNA中加入酶标FAM抗体后在37℃时置于恒温振荡器中反应，反应后使用洗涤液洗涤。