[发明专利]检测血清中NOX1 mRNA转录水平的RT-PCR引物、评估高血糖人群并发肠癌易感性的试剂盒及评估方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种引物、试剂盒以及评估高血糖人群并发结直肠癌易感性的方法；尤其涉及一种检测血清中NOX1 mRNA转录水平的RT-PCR引物、用于评估高血糖人群并发结直肠癌易感性的RT-PCR试剂盒及评估高血糖人群并发结直肠癌易感性的方法。属于实时荧光定量逆转录聚合酶链反应试剂盒开发与人体病理学相结合的技术领域。

背景技术

据世界卫生组织（WHO）统计，全世界逾2.2亿人患有糖尿病，2004年有340万人死于高血糖引发的严重并发症，至2030年因患糖尿病而死亡的人数将再增加一倍。在年龄≧20岁的中国人群中，糖尿病和糖尿病前期患病率分别为9.7%和15.5%，以此推算目前中国有近一亿成年人患有糖尿病，约1.5亿成年人处于糖尿病前期，中国已成为世界上糖尿病患者最多的国家。

结直肠癌（colorectal cancer, CRC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，全球每年约100万新发病例，在恶性肿瘤发病率居第3～5位，并呈逐年上升趋势；其死亡率约为20.51%，居第4～5位；我国结直肠癌每年新发病例高达13万～16万人，目前患病率已经高达69.9/10万，已经成为中国三大癌症之一，全国肿瘤登记中心发布的《2012中国肿瘤登记年报》统计结直肠癌已达肿瘤发病率、死亡率的第五位，并逐年升高。

国内外多项流行病学证实糖尿病与结直肠癌发病率及预后密切相关，高血糖状态被认为是结直肠癌发病及进展的重要危险因素之一。糖尿病尤其是2型糖尿病与结直肠癌具有诸多共同的发病风险因素，如肥胖、高热量饮食、缺乏运动等。对于某些高血糖人群（尤其是T2DM患者）可能已成为易患结直肠癌的高危人群。长期的高血糖状态可能通过激活某些基因表达，进而参与了结直肠癌的发生发展。因此，筛选出可用于高血糖人群并发结直肠癌易感性预警、病程及预后评估的糖尿病并发结直肠癌分子标志物，进而进行有针对性地早诊早治，对肿瘤患者的病程及预后判断、治疗方案制定、生存率提高及生活质量的改善均具有重要意义。

1983 年Mμllis 发明了聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术。PCR技术是一种体外核酸扩增技术，具有特异、敏感、产率高、快速、简便等突出优点。应用PCR技术可以使特定的基因或DNA片段在很短的时间内体外扩增数十万至百万倍。由于该项技术具有简便快速、特异性和灵敏度高、重复性好等突出优点，因此被广泛应用于基础研究和临床诊断。但是传统的PCR 技术在应用中存在着不能对特定mRNA 进行准确定量，以及操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，因此不能够满足实际工作需要，使其应用受到限制。

随着实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR, qPCR）的出现，人们可以真正做到对PCR 样本中微量mRNA 的精确定量。qPCR是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现实时监测整个PCR进程，并能对起始模板进行定量分析。RT-PCR需要荧光探针参与，在PCR 的反应体系中加入一对含有待测基因特定碱基的引物序列，该引物序列能与模板核酸发生特异性杂交。PCR 每复制一个核苷酸片段，就有一个荧光信号被释放出来，产物与荧光信号产生一对一的对应关系。随着产物的增加，荧光信号亦随之增强，当信号增强到某一阈值时（根据荧光信号基线的平均值和平均标准差，计算出99.7％的置信度大于平均值的荧光值，即为阈值），此时的循环次数即循环阈值Ct(cycle threshold，Ct) 被记录下来。该循环参数Ct 和PCR 体系中起始模板数的对数之间有严格的线性关系。利用不同梯度的阳性定量标准模板扩增的Ct 值和该阳性定量标准的模板数经过对数拟合制成标准曲线，再根据待测样品的Ct 值就可以准确的确定起始模板的数量，因此根据PCR 产物的荧光强度即可计算出初始模板的数量。实时荧光定量PCR 具有特异性强、灵敏度高、定量准确、操作安全等优点，使用该方法扩增特异性mRNA，是一种高灵敏度、高特异性、操作简便的方法。

因此，本领域迫切希望利用RT-qPCR技术将高血糖人群的状态予以监控，届时将容易地评估高血糖人群并发结直肠癌的易感性及预后，有助于糖尿病并发结直肠癌患者的早期预警、早诊早治、预后评估，对于降低我国糖尿病、结直肠癌的高发病率、高致死率具有重大的应用价值。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了检测血清中NOX1 mRNA转录水平的RT-PCR引物。

本发明解决上述问题的技术方案如下：

检测血清中NOX1 mRNA转录水平的RT-PCR引物：