[发明专利]一种检测白血病相关融合基因的引物和探针、及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及基因型的检测，具体讲，涉及一种检测白血病相关融合基因的引物和探针、及其试剂盒。

背景技术

白血病(Leukemia)是造血系统的恶性肿瘤，其特征是骨髓、淋巴结等造血系统中一种或多种血细胞发生恶性增殖，并浸润体内各组织脏器，导致正常造血组织细胞受抑制，产生各种症状。白血病临床上常以发热、出血、贫血，肝、脾、淋巴结肿大为特点。白血病一般按自然病程和细胞发育程度可分为急性白血病(AL)和慢性白血病(CL)，根据白血病细胞的形态和生化特征，又可分为急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性非淋巴细胞白血病(ANLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性粒－单核细胞白血病(CMML)等。

白血病是国内十大高发恶性肿瘤之一，其发病率为2.76/10万人口，我国估计有5万以上患者，且白血病患者的数量正逐年增加。白血病的发病率虽然在肿瘤发病率中排第6位，但在儿童和青少年恶性肿瘤的发病率和死亡率中均占第1位。

近年临床研究表明，大部分白血病和淋巴瘤存在某些染色体畸变，如易位、缺失、插入等。这些染色体易位畸变时大部分情况下会产生新的融合基因，这些融合基因可作为用于诊断不同类型白血病和淋巴瘤的分子标志。不同类型的白血病化疗和放疗的方案是不同的。所以，对这些分子标记进行检测分析有利于治疗方案的确定和分析预后。因此，世界卫生组织2000年发布的白血病和淋巴瘤诊断标准已将染色体易位后融合基因检测作为最重要的指标之一。

目前对白血病的检查主要有，血象检查，骨髓涂片检查，血液生化检查等，但这些都没有对融合基因进行检查，获得的结果误差范围也比较大。目前检测融合基因的方法主要包括荧光原位杂交技术(FISH)，PCR和基因芯片等。但这些方法存在着准确性差、操作复杂等缺陷，临床应用困难。

为了帮助临床医生们准确及时检测白血病融合基因、辅助确定相关化疗方案及复发检测，本发明从中国国情出发，开发了白血病相关融合基因检测试剂盒，该试剂盒能定性检测人骨髓标本中的白血病相关融合基因22种的RNA量，从而指导白血病临床诊断和用药。

发明内容

本发明涉及一种检测白血病相关融合基因的引物和探针、试剂盒。

为了完成本发明的目的，采用的技术方案为：

一种检测白血病相关融合基因的引物和探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～72所示。

其中：

(1)用于检测SIL-TAIL融合基因的引物和探针为：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物R1，由SEQ ID NO:68所示的下游引物R2，由SEQ ID NO:3所示的探针，其中SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列的5’端有HEX标记，3’端有BH1标记；

(2)用于检测E2A-HLF融合基因的引物和探针为：由SEQ ID NO:4所示的上游引物，由SEQ ID NO:5所示的下游引物，由SEQ ID NO:6所示的探针，其中SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列的5’端有Cy5标记，3’端有BH2标记；

(3)用于检测BCR-ABL融合基因的引物和探针为：由SEQ ID NO:7所示的上游引物F1，由SEQ ID NO:8所示的上游引物F2，由SEQ ID NO:9所示的上游引物F3，由SEQ ID NO:10所示的下游引物，由SEQ ID NO:11所示的探针，其中SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列的5’端有FAM标记，3’端有BH1标记；

(4)用于检测E2A-PBX1融合基因的引物和探针为：由SEQ ID NO:4所示的上游引物,由SEQ ID NO:12所示的下游引物，由SEQ ID NO:6所示的探针，其中SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列的5’端有Cy5标记，3’端有BH2标记；

(5)用于检测MLL-AF4融合基因的引物和探针为：由SEQ ID NO:17所示的上游引物F1，由SEQ ID NO:18所示的上游引物F2，由SEQ ID NO:13所示的下游引物R1，由SEQ ID NO:67所示的下游引物R2；由SEQ ID NO:22所示的探针P1，其中SEQ ID NO:22所示的核苷酸序列的5’端有HEX标记，3’端有BH1标记，由SEQ ID NO:23所示的探针P2，其中SEQ ID NO:23所示的核苷酸序列的5’端有HEX标记，3’端有BH1标记；