[发明专利]一种检测胶孢炭疽菌的环介导等温扩增引物组合物及其应用

权利要求书

1.SEQ ID NO.1所示的胶孢炭疽菌的谷氨酰胺合成酶编码基因序列作为检测靶标在检测胶孢炭疽菌中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于SEQ ID NO.1所示的胶孢炭疽菌的谷氨酰胺合成酶编码基因序列作为检测靶标在LAMP检测胶孢炭疽菌中的应用。

3.一种检测胶孢炭疽菌的LAMP引物组合物，其特征在于由SEQ ID NO.2所示的正向外引物GS-F3，SEQ ID NO.3所示的反向外引物GS-B3，SEQ ID NO.4所示的正向内引物GS-FIP，SEQ ID NO.5所示的反向内引物GS-BIP，SEQ ID NO.6所示的环引物GS-LF，SEQ ID NO.7所示的环引物GS-LB组成。

4.权利要求3所述的LAMP引物组合物在检测胶孢炭疽菌中的应用。

5.权利要求3所述的LAMP引物组合物在制备胶孢炭疽菌检测试剂中的应用。

6.一种用于检测胶孢炭疽菌的LAMP试剂盒，其特征在于包含权利要求3所述的LAMP引物组合物。

7.根据权利要求6所述的LAMP试剂盒，其特征在于包含检测溶液，每毫升所述的检测溶液通过以下方法制备得到：0.8μM正向内引物GS-FIP、0.8μM反向内引物GS-BIP、0.1μM正向外引物GS-F3、0.1μM反向外引物GS-B3、0.1μM环引物GS-LF、0.1μM环引物GS-LB、1.4mM dNTPs、8mM MgSO₄、0.8M甜菜碱、0.8M pH 8.8的Tris-HCl、0.4mM KCl、0.4mM(NH4)₂SO₄、4％Triton X-100、8U·μL^-1Bst DNA聚合酶，加入超纯水制备成1ml检测溶液。

8.根据权利要求6或7所述的LAMP试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还含有染料SYBR Green I。

9.一种LAMP检测胶孢炭疽菌的方法，其特征在于包括取21μL权利要求7所述的检测溶液，加入4μL待检DNA溶液，总体积为25μL进行LAMP反应；反应程序为：64℃，70min；扩增后加入0.25μL染料SYBR Green I作为反应指示剂，肉眼观察，以SYBR Green I的颜色变化和荧光强弱做为结果判定标准：在常光下，黄绿色表示检测为阳性，即有胶孢炭疽菌存在，橙色表示检测结果为阴性，即不含有胶孢炭疽菌，或所含胶孢炭疽菌未达检测限。