[发明专利]一种检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒

权利要求书

1.一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述DNA选自人类21,18,13号染色体，针对所述21,18,13号染色体，分别设计有300对序列特异性引物，每对所述序列特异性引物包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-2700。

2.根据权利要求1所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，与序列特异性引物相结合的序列为核心序列，所述核心序列在5′端，所述核心序列包括5-15个碱基的保护序列。

3.根据权利要求2所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物组中，在延伸引物5′端增加有作为接头的碱基序列。

4.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物的每个位点均是以游离DNA的上一段特异性序列为模板而得到的三段连续引物，所述三段引物连接后形成PCR模板。

5.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物在目标染色体上的序列唯一。

6.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述序列特异性引物的退火温度相同。

7.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述编号为SEQ ID NO：1-2700的序列特异性引物与编号为SEQ ID NO:2701-2702的通用引物序列互补性最低。

8.根据权利要求3所述的利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的引物组，其特征在于，所述编号为SEQ ID NO：1-2700的序列特异性引物与具有多态性和染色体拷贝数变异的序列不一致。

9.一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）分离、提取母体外周血血浆中的外周血游离DNA，即cfDNA；

（2）针对人类21，18和13号染色体，分别设计300对序列特异性引物，每对所述引物包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-2700；

（3）采用生物素对cfDNA末端进行标记，将标记后的cfDNA与磁珠结合，然后进行扩增，扩增产物构成文库，对扩增产物进行测序；和

（4）对正常孕妇的产检数据进行分析并建立正态分布，根据Y. M. Dennis Lo染色体异倍检测方法，对染色体拷贝数进行Z检验。

10.一种利用母体外周血中血浆游离DNA检测胎儿三倍体的试剂盒，包括：（1）PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括序列特异性引物、通用PCR引物、DNA聚合酶、DNA连接酶、末端转移酶、dNTPs和反应缓冲液；（2）PCR反应产物的纯化试剂，包括产物纯化磁珠及缓冲液；和（3）阴性质控品和阳性质控品，其特征在于，所述DNA选自人类21,18,13号染色体，针对所述21,18,13号染色体，分别设计有300对序列特异性引物，每对所述序列特异性引物均包括正向引物，反向引物和中间引物，所述序列特异性引物的序列编号为SEQ ID NO：1-2700。