[发明专利]一种检测胎儿三倍体的引物组、方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用母体外周血中血浆游离DNA以检测胎儿三倍体的产品、方法及试剂盒，即利用PCR技术和测序技术，对来自母体外周血的游离DNA进行检测，从而判断胎儿是否为三倍体。

背景技术

胎儿染色体的非整倍性检测是重要的产前检查之一^[1,2]。目前产前检查包括筛查和诊断。筛查包括分析血清标志物、胎儿超声检测（如胎儿颈项透明层厚度的超声测量），但敏感性和特异性还有待提高^[1]。诊断检测包括有创的绒毛膜取样（chorionic villus sampling，CVS）或羊膜穿刺术。目前的筛查方法的准确度还不是令人满意，因此还不能用于普查。诊断检测虽然准确度高，但由于是有创的，有导致健康胎儿流产的风险^[3]。

在过去的几十年，研究人员们致力于开发一种母体血液检查技术来提高胎儿染色体非整倍性检测的准确性和安全性。最初是想从孕妇的循环血液中分离出胎儿细胞并对其进行分析，但结果不可靠，因为无法从母体血液中获取足够多的胎儿细胞^[4-6]。最近由于提取母体外周血中游离DNA（cell-free DNA，cfDNA）技术的进步，对胎儿染色体数目异常进行检测的技术得到了明显提高。cfDNA中除了来自母体的DNA外，还有来自胎儿的DNA。因此通过分析来自胎儿的DNA可以判断胎儿的染色体状态。一些研究人员已经成功运用大规模平行DNA鸟枪测序法分析母血中游离DNA方法来判断胎儿是否有21-三体综合症、18-三体综合症和13-三体综合症^[7-11]。

尽管大规模平行DNA鸟枪测序法的技术性能过硬，但是这项技术花费颇高且流程和数据分析很繁杂，因为运用大规模平行DNA鸟枪测序法分析所有染色体上的随机基因组片段时会产生大量不需要的测序数据。例如，在一项需要测定胎儿是否有21三体综合症的研究中读取每个样本平均会产生10,800,000个测序结果，但是平均只会用到32,000 (0.3%)个21染色体的测序结果来确定胎儿染色体的非整倍性[7]。

最近报道了一种选定区域数字分析法(digital analysis of selected regions，DANSR)，它将选择性分析游离DNA中特定的基因组片段^[12]。通过选择性分析游离DNA，选定区域数字分析法能够更有效地判断胎儿染色体是否出现非整倍态。在报道的方法中，研究者采用了384对引物来扩增胎儿DNA。该法能准确判定胎儿是否有三体综合症。但由于引物数量大，导致费用高和对PCR反应的条件要求高。

综上所述，目前虽然有了选定区域数字分析法，但其费用较高，效率较低。开发费用更低的方法能促进三体综合症无创筛查的普及，对提高我国的人口素质有重大意义。

参考文献：

[1] ACOG Practice Bulletin No. 77. Screening for chromosomal aneuploidies. ObstetGynecol 2007; 109: 217-27.

[2] Nicolaides KH. Screening for fetal aneuploidies at 11 to 13 weeks. PrenatDiagn 2011; 31(1): 7-15.

[3] Caughey AB, Hopkins LM, Norton ME. Chorionic villus sampling compared with amniocentesis and the difference in the rate of pregnancy loss. ObstetGynecol 2006; 108(3 Pt 1): 612-6.