[发明专利]用于检测肿瘤标志物MUC1的电化学发光适配体传感器的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种电化学发光适配体传感器，尤其是涉及一种用于检测肿瘤标志物MUC1的电化学发光适配体传感器的制备方法及其应用。

背景技术

近年来全球癌症发病状况日趋严重，死于恶性肿瘤的患者逐年增多，能够实现对肿瘤的早期诊断和治疗是降低死亡率的关键，目前癌症的临床诊断主要通过监测人体内肿瘤标志物的含量实现。肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身产生或者由宿主对体内肿瘤反应而产生的一类生化物质，包括肿瘤相关蛋白类标志物、激素类标志物、酶类标志物、基因类标志物和胚胎抗原等，可在肿瘤组织、血液、体液或排泄物中检测出来。

MUC1又名多态性上皮粘蛋白，是一种广泛分布于机体各种粘膜表面的高分子量糖蛋白。正常情况下MUC1主要表达于多种器官、组织上皮细胞的细胞膜胞膜顶端，呈顶端分布或极性分布，但在多种肿瘤细胞中，MUC1的表达出现量和质的改变，并与肿瘤的浸润、转移及预后相关，是一种非常有价值的肿瘤标志物。因此，简单、快速、准确地检测肿瘤标志物MUC1，对多种癌症的早期诊断及预后判断具有重要意义。

目前，检测肿瘤标志物MUC1的方法主要有放射免疫分析法、荧光免疫分析法、酶联免疫分析法和电化学免疫分析法等，这些方法都是基于抗原—抗体特异性结合反应，灵敏度高、特异性强，但也存在一个共同的不足之处，即抗体难以获得、成本高、稳定性差，除此之外，上述方法或具有放射性危害、或操作过程繁琐、或检测成本偏高。因此，开发灵敏度高、特异性强、简单价廉于一体的分析方法，实现肿瘤标志物MUC1的快速检测，仍是当前的迫切需求。

核酸适配体是通过指数富集配体系统进化技术（SELEX）筛选出的、可通过折叠形成特定空间结构与靶分子特异性结合的人工单链DNA或RNA序列，具有高特异性、高亲和性，被喻为“化学抗体”。作为分子识别体系，与抗体相比，核酸适配体的优越性是显著的：①抗体必须使用动物或者细胞系产生分子，而核酸适配体通过体外方法合成与分离；②核酸适配体容易并且可重复合成，批次间的差异小，易于保存，稳定性、亲和性和特异性均优于抗体；③核酸适配体对温度有高度的稳定性，而抗体是大蛋白分子，对温度敏感，会产生不可逆的变性。因此，核酸适配体在生物传感与分析分离、核酸功能研究、核酸自组装材料及器件、疾病诊断与治疗等研究领域，展现出广阔的应用前景。

电化学发光（ECL）是对浸入含电化学发光物质的体系的电极施加一定电压或者电流而产生的化学发光现象，综合了电化学和化学发光的优点，是一种灵敏度高、可视性强、仪器简单、可控性强、稳定性好、重现性好的分析方法。目前，国内外还没有公开任何关于基于磁性氧化石墨烯、电化学发光体和对肿瘤标志物MUC1具有特异性识别能力的核酸适配体的用于检测肿瘤标志物MUC1的电化学发光适配体传感器的制备方法及其应用方面的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种组装过程简单，操作方法简便，检测结果灵敏和准确性高、特异性强的用于检测肿瘤标志物MUC1的电化学发光适配体传感器的制备方法及其应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种用于检测肿瘤标志物MUC1的电化学发光适配体传感器的制备方法，包括以下步骤：

（1）多功能化氧化石墨烯材料的合成

a. 磁性氧化石墨烯的合成：在洁净的三颈烧瓶中加入30～50 mL 1 mg/mL的氧化石墨烯（GO），超声1 h；然后在氮气氛保护下加入20～30 mL 0.05～0.07 mol/L的氯化亚铁溶液和20～30 mL 0.10～0.15 mol/L的氯化高铁溶液，于70～90℃搅拌回流，同时缓慢滴加10～15 mL 20%～30%的氨水至溶液的pH = 10～11，回流处理3～5 h；冷却后，用二次水洗涤至溶液的pH = 7，定容到50 mL，即得磁性氧化石墨烯材料溶液，4 ℃储存备用；