[发明专利]人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法、产品与应用

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)分选提取健康人脐带间充质干细胞；

b)经体外培养、扩增，大量收集低传代倍数的细胞培养上清及细胞裂解液；

c)通过以下特有步骤低温真空制备得到细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的冻干粉。

2.如权利要求1中所述人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，其特征在于：步骤a中，采用磁性无损分选方法进行健康人脐带间充质干细胞的分选提取，所述磁性无损分选方法为：通过在分选磁珠上包裹一层海藻酸钠，所述海藻酸钠上连接有可以与待分选的脐带间充质干细胞特异性结合的抗体，结合与磁性富集后，再将所述海藻酸钠进行降解，即得到去除磁珠和海藻酸钠脐带间充质干细胞。

3.如权利要求1中所述人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，其特征在于：步骤b中，包括以下过程：人脐带间充质干细胞在50ml培养瓶中培养，当生长到100％汇合度时，收集培养上清液，并与等体积的新鲜培养基混合，继续用于细胞的扩大培养，如此反复至细胞传代至10代，收集全部细胞培养上清液。

4.如权利要求1中所述人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，其特征在于：步骤b中，脐带间充质干细胞传代培数在2-10之间。

5.如权利要求1中所述人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，其特征在于：步骤c中，低温真空制备过程具体包括：收集所得细胞培养上清及细胞裂解液分别于4℃，-20℃，-80℃梯度降温冻存凝固备用；最后将-80℃冻存凝固的上清液抽真空，升华干燥，除去冰晶.最后制得冻干粉，－20℃保存。

6.一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液，其特征在于：根据权利要求1-5中任一所述方法进行制备得到。

7.如权利要求6中所述人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液在具有生物学活性功能的产品中的应用。