[发明专利]人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法、产品与应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞因子技术领域，具体是一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，本发明还涉及通过该方法制备得到的人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液及其应用。

背景技术

干细胞在美容中的应用，最早是干细胞在整形外科中的运用，它是目前研究较多的一种干细胞美容技术。而在整形外科中应用得较多的干细胞种类主要亦是人脐带间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞等。

传统上所谓的干细胞美容术，一般都是直接注射干细胞针剂。而这种注射用干细胞的来源主要是从流产的胚胎中提取的，所以难免会引起免疫排斥反应，而且存在一定的论理问题。即使是采用自体干细胞，如人脂肪间充质干细胞，但是在干细胞的培养扩增过程中亦难免会引入外源性的蛋白(胎牛血清)，容易引起免疫排斥反应。所以，科学家们最近提出一种新干细胞应用方法，细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的应用。

研究表明细胞培养上清液含有各种具有生物活性的细胞因子，它的应用可以避免干细胞美容时的产生的免疫排斥反应。但是，液态的培养上清在常温保存时间短，这就阻碍了它的推广和应用。

另外，针对目前的干细胞分选技术，比较常见是的磁珠分选，但常规的分选中，磁珠会随同干细胞一同进行后续的培养，即磁珠并没有从干细胞上脱离下来，这样对于干细胞的后期生产，必定会产生一定的影响，虽然有一些方法，如加入一些菌或者其他物质进行降解，但这样也相当于加入了其他的外源蛋白质等成分，造成对干细胞的二次污染，所以实际想并没有解决上述问题。

又及，干细胞及其培养物具有诸多功效，但目前除了的应用并不充分，因此，还需要对其应用做一推广和发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，分选过程对细胞无损伤，培养过程无任何动物源成分，得到的产品纯净度高，生物活性高。

本发明的另一个目的在于提供了一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液，纯度高，生物活性高，而且保存期限长，实用性更高。

本发明的另一个目的在于提出了一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液在具有生物学活性功能的产品中的应用，具有极高的社会与经济效应。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备方法，包括以下步骤：

a)分选提取健康人脐带间充质干细胞；

b)经体外培养、扩增，大量收集低传代倍数的细胞培养上清及细胞裂解液；

c)通过以下特有步骤低温真空制备得到细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的冻干粉。

进一步，步骤a中，采用磁性无损分选方法进行健康人脐带间充质干细胞的分选提取，所述磁性无损分选方法为：通过在分选磁珠上包裹一层海藻酸钠，所述海藻酸钠上连接有可以与待分选的脐带间充质干细胞特异性结合的抗体，结合与磁性富集后，再将所述海藻酸钠进行降解，即得到去除磁珠和海藻酸钠脐带间充质干细胞。

进一步，步骤b中，包括以下过程：人脐带间充质干细胞在50ml培养瓶中培养，当生长到100％汇合度时，收集培养上清液，并与等体积的新鲜培养基混合，继续用于细胞的扩大培养，如此反复至细胞传代至10代，收集全部细胞培养上清液。

进一步，步骤b中，脐带间充质干细胞传代培数在2-10之间。

进一步，步骤c中，低温真空制备过程具体包括：收集所得细胞培养上清及细胞裂解液分别于4℃，-20℃，-80℃梯度降温冻存凝固备用；最后将-80℃冻存凝固的上清液抽真空，升华干燥，除去冰晶.最后制得冻干粉，－20℃保存。

根据所述方法进行制备得到的一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液。

所述人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液在具有生物学活性功能的产品中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：