[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌的DNA传感器及其制备与应用

权利要求书

1.一种检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述方法是利用DNA生物传感器；所述DNA生物传感器的制备，是将含壳聚糖的碳纳米管、纳米金依次修饰到清洁的金电极表面，然后将含巯基的探针ssDNA滴加到修饰后的电极上，孵育，再用6-巯基己醇封闭，即制得基于电化学碳纳米管/金纳米粒子自组装DNA传感器；

所述探针ssDNA的序列是SEQ ID NO.1所示的序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA生物传感器的制备具体是：(1)碳纳米管修饰金电极：将4～6μL的每mL含有0.5～2mg碳纳米管的碳纳米管溶液滴加到清洁的2mm金电极表面，孵育30～40min；(2)纳米金修饰金电极：将氯金酸溶于硝酸钾溶液中，配制成纳米金溶液，将上一步得到的碳纳米管修饰金电极浸入纳米金溶液中进行电镀沉积，即制备得到修饰好的电极；(3)探针ssDNA滴加：将4～6μL的探针ssDNA滴加到修饰好的电极表面，孵育30～40min；(4)封闭：滴加6～8μL浓度为0.5～2mM的6-巯基己醇，孵育40～60min，即得到自组装电化学DNA传感器。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述DNA生物传感器的制备是(1)将5mg碳纳米管溶于5mL 1％的壳聚糖中，超声分散2h，得到碳纳米管溶液，滴加5μL到抛光的金电极表面，37℃孵育30min，得到碳纳米管修饰的金电极；(2)将1％(v/v)的氯金酸溶于0.1M的硝酸钾中，配制成氯金酸浓度为3.3mM的纳米金溶液，将孵育好碳纳米管修饰的金电极浸入纳米金溶液，并控制电位电解库伦法进行电镀沉积，电解电位为-0.2V，电解时间为300s，制得纳米材料修饰的金电极；(3)滴加1.0x10^-6M的探针ssDNA，37℃下孵育30min；(4)然后滴加8μL浓度为1mM的6-巯基己醇，在室温下孵育50min封闭，即制备得到自组装电化学DNA传感器。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)滴加不同浓度的互补ssDNA到制备好的DNA生物传感器上，孵育、清洗，然后用亚甲基蓝溶液浸泡，再采用微分脉冲伏安法测定还原电流变化，得到互补ssDNA与电流值变化大小的标准曲线；(2)将待测样品滴加到制备好的传感器上，孵育、清洗，然后用亚甲基蓝溶液浸泡，再测定电流值变化大小，根据上一步得到的标准曲线计算样品中目标ssDNA的浓度。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述亚甲基蓝溶液浸泡是使用1.0x10^-5～7x10^-5M浓度的亚甲基蓝溶液中浸泡2min～16min，然后清洗氮气吹干。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述亚甲基蓝溶液中浸泡，是使用5.0×10^-5M的亚甲基蓝溶液浸泡12min。

7.根据权利要求4-6任一所述的方法，其特征在于，所述互补ssDNA浓度为1.0x10^-15～1.0x10^-8M，标准曲线为ΔI(μA)＝11.7238log[c/(M)]+215.9663。