[发明专利]一种抗癌药物的筛选方法

权利要求书

1.一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下：

 将抗小鼠IgG抗体和抗兔IgG抗体的N端修饰NHS基团后，分别与5′端修饰有叠氮基团的单链Arm1 （SEQ ID NO:1）、Arm 2（SEQ ID NO:2）偶联，形成探针1、探针2；

 培养Panc1胰腺癌细胞株，将待筛选的药物分别加入已贴壁的细胞培养容器中，形成不同药物处理实验组，并设置没有加任何药物的对照组；

 药物作用结束后，加入特异性针对Hsp90的兔抗以及特异性针对Cdc37的鼠抗，后加入步骤中制备的探针1和探针2与上述兔抗和鼠抗进行反应；

反应结束后，加入长单链连接DNA(SEQ ID NO:3)和短单链连接DNA(SEQ ID NO:4)，连接反应缓冲液以及T4连接酶进行连接反应，然后加入DNA聚合酶及反应缓冲液，进行滚环复制反应，结束后加入荧光检测单链DNA(SEQ ID NO:5)以及细胞核染料，通过DNA杂交使单荧光信号堆积，最后在普通荧光显微镜下观察；

以对照组为参照，筛选出荧光信号减少的实验组，该组别所加药物即为所需抗癌药物。

2.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中Panc1胰腺癌细胞株培养于24孔板中，细胞密度为2×10⁵个/每孔。

3.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中，所加待筛选的药物作用浓度为10μM，加入药物后37℃作用1小时。

4.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中，可将药物作用后的细胞固定于玻片上。

5.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中，在加入特异性针对Hsp90的兔抗以及特异性针对Cdc37的鼠抗之前，可对细胞进行封闭处理，对非特异性蛋白及DNA进行封闭。

6.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中，加入特异性针对Hsp90的兔抗以及特异性针对Cdc37的鼠抗后的反应条件为：4℃过夜。

7.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中加入长单链连接DNA(SEQ ID NO:3)和短单链连接DNA(SEQ ID NO:4)，连接反应缓冲液以及T4连接酶进行连接反应的反应条件为：37℃反应30min。

8.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中

加入DNA聚合酶及反应缓冲液进行滚环复制反应的反应条件是：37℃反应90min。

9.根据权利要求1所述一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，步骤中所使用的细胞核染料为4',6-二脒基-2-苯基吲哚。