[发明专利]一种海菜花种苗组培快速繁殖方法

权利要求书

1.一种海菜花种苗组培快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将处理干净的海菜花果实置于100～200 mg/L的甲基托布津溶液浸泡0.3～1 h，自来水冲洗干净后，在超净工作台上先用70～75%(v/v)酒精浸泡1～2 min，再用浓度为0.1～0.2%(w/v)升汞浸泡15～20 min，无菌水冲洗5～6遍，获得无菌果实；

（2）将步骤（1）获得的无菌果实用手术刀纵向切开，选取种皮为黑色或褐色的种子接到萌发培养基中进行培养形成幼芽；

（3）以步骤（2）获得的无菌幼芽为材料，去除胚根和叶片后，转接到继代增殖培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；

（4）经过增殖扩繁后，将植株高度达到4 cm的小苗转接到生根培养基上进行生根培养，获得完整试管苗；

（5）将完整试管苗直接在水质良好的水域中进行移栽定植；

其中，所述萌发培养基为：MS、6-BA 0.5～2.0 mg/L、NAA 0.1～0.5 mg/L、琼脂4.5～6.0 g/L、蔗糖30 g/L，pH为5.8～6.2；

所述继代增殖培养基为：改良MS、6-BA 1.0～2.0 mg/L、KT 0.5～1.0 mg/L、NAA 0.1～0.5 mg/L、酸水解酪蛋白0.2～0.5 g/L、椰子汁100～200 mg/L、蔗糖20 g/L、琼脂4.5～6.0 g/L，pH为5.8～6.2；

所述生根培养基为：改良MS、NAA0.1～0.2 mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂4.5～6.0 g/L，pH为5.8～6.2。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述萌发培养基表面加4～6 cm的无菌水；培养条件：温度28±2℃的暗培养。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）、（4）中所述培养基表面加4～6 cm的无菌水；培养条件：光照强度2000 lux，光照时间10±2 h/d ，温度 25±2℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）、（4）中所述的改良MS为：(1) NH₄NO₃ 1650 mg/L、(2)KNO₃ 1900 mg/L、(3)CaCl₂﹒2H₂O 440 mg/L、(4)MgSO₄﹒7H₂O 370 mg/L、(5)KH₂PO₄ 170 mg/L、(6)Na₂-EDTA 37.3 mg/L、(7)FeSO₄﹒7H₂O 27.8 mg/L、(8)MnSO₄﹒4H₂O 22.3 mg/L、(9)ZnSO₄﹒7H₂O 8.6 mg/L、(10)H₃BO₃ 6.2 mg/L、(11)KI 0.83 mg/L、(12)Na₂MoO₄﹒2H₂O 0.25 mg/L、(13)CuSO₄﹒5H₂O 0.025 mg/L、(14)CoCl₂﹒6H₂O 0.025 mg/L、(15)盐酸硫胺素VB₁ 0.3 mg/L、(16)烟酸0.5 mg/L、(17)肌醇100 mg/L、(18)甘氨酸2 mg/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述甲基托布津的浓度为150 mg/L，浸泡时间为0.3 h；酒精浓度为70%(v/v)，浸泡时间为2 min；升汞浓度为0.2%(w/v)，浸泡时间为15 min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述种子萌发培养基为：MS、6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L、琼脂5.5 g/L、蔗糖30 g/L，pH为5.8。