[发明专利]一种海菜花种苗组培快速繁殖方法

说明书

技术领域

 本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种含高蛋白的水生植物海菜花种苗组培快速繁殖方法。

背景技术

海菜花Ottelia acuminata(Gagnep.)Dandy是一种多年生大型沉水植物，我国特有种，国家二级保护植物。海菜花能大量吸收水中的营养物质，减少氮、磷含量，还可分泌一些化感物质抑制藻类生长，因此在解决水体富营养化及水华爆发等生态问题中具有重要作用，被誉为净化水质的“试金石”。海菜花含有丰富的蛋白质、钙、磷等多种营养成分，是一种非常受欢迎的绿色蔬菜，同时也是产区人们发展养殖业的主要饲料来源。此外，海菜花花期长、观赏性好，还能形成“花—鱼—鸟”的独特立体生态景观，具有良好的开发应用前景。

然而，在自然条件下由于水流、底质及动物取食等原因，萌发的海菜花种子幼苗很难成活；再加上其雌雄佛焰苞及花茎大多被采摘食用，又进一步减少了种子数量。而分株繁殖时，1株成年植株每年也只能分殖3～5株苗，繁殖系数相当低，而且海菜花的茎极度短缩，植株成丛生状，分株时容易受伤并难以成活。近年来由于湿地破坏及人类过渡采挖等因素的影响，海菜花种群数量急剧减少，已处于濒危状态，严重制约了海菜花的应用。可见，与其它沉水植被一样，海菜花的种苗快速规模化繁殖正是困扰其植被恢复，以及开发利用的关键所在。

植物组织培养技术在种苗繁育中得到广泛应用，技术也相对成熟。利用组织培养技术繁殖海菜花，可在短期内获得大量优良种苗，为海菜花种质资源的保护及开发利用提供技术支撑，具有良好的应用前景。目前，针对海菜花的研究多集中于生物学、生态学及分类学领域，而对于海菜花种苗组织培养技术的研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用植物组织培养技术快速获得大量海菜花种苗的繁殖方法，具有繁殖速度快、种苗质量好、可操作性强等特点，并克服了水生植物组织培养中外植体消毒灭菌困难的问题。

本发明以蛋白含量高、观赏性好并具有水质净化功能的大型沉水植物海菜花为材料，利用植物组织培养技术进行种苗快速繁殖研究，通过果实处理及消毒灭菌、种子萌发诱导培养、芽继代增殖培养、生根诱导及试管苗移栽研究，获得海菜花种苗快速繁殖的方法，从而实现了本发明的目的。

本发明一种海菜花种苗组培快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）从野外采集朔果充分膨大、果皮呈深蓝色或浅黄色、无病虫的完整海菜花果实，去除果皮表面附着物，并用洗洁精擦洗干净，后用100～200 mg/L的甲基托布津溶液浸泡0.3～1h，自来水冲洗干净；在超净工作台上先用70～75%(v/v)酒精浸泡1～2 min，再用浓度为0.1～0.2%(w/v)升汞浸泡15～20 min，无菌水冲洗5～6遍，获得无菌果实；

（2）将步骤（1）获得的无菌果实用手术刀纵向切开，将种子接到萌发培养基中培养形成幼芽；

（3）以步骤（2）获得的无菌幼芽为材料，去除胚根和叶片后，转接到继代增殖培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；

（4）经过增殖扩繁后，将植株高度达到4 cm的小苗转接到生根培养基上进行生根培养，获得完整试管苗；

（5）将完整试管苗直接在水质良好的水域中进行移栽定植；

其中，所述萌发培养基为：MS、6-BA 0.5～2.0 mg/L、NAA 0.1～0.5 mg/L、琼脂4.5～6.0 g/L、蔗糖30 g/L，pH为5.8～6.2；

所述继代增殖培养基为：改良MS、6-BA 1.0～2.0 mg/L、KT 0.5～1.0 mg/L、NAA 0.1～0.5 mg/L、酸水解酪蛋白0.2～0.5 g/L、椰子汁100～200 mg/L、蔗糖20 g/L、琼脂4.5～6.0 g/L，pH为5.8～6.2；

所述生根培养基为：改良MS、NAA0.1～0.2 mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂4.5～6.0 g/L，pH为5.8～6.2。

所述培养基中，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤；NAA为1-萘乙酸；KT为6-糠氨基嘌呤（激动素）。