[发明专利]一种鼠妇纤溶酶及其应用

权利要求书

1.一种鼠妇纤溶酶，其特征在于所述鼠妇纤溶酶具有溶栓和抗凝活性，分子量为37.5-38.5KDa，且自N端起第1-15位氨基酸残基的序列为：Asp – Ile – Asn – Gly – Gly – Gly– Ala – Thr – Leu – Pro – Gln – Pro – Leu – Tyr – Gln；所述鼠妇纤溶酶采用如下方法制备：

（1）将鼠妇采用湿法超微粉碎，获得提取液；

（2）从所述提取液中提取分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分；

（3）对步骤（2）所述分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分采用硫酸铵沉淀法进行纯化，获得粗蛋白；

（4）将所述粗蛋白经凝胶过滤层析和阴离子交换层析，取具有溶栓活性的洗脱液，得到鼠妇纤溶酶；步骤（4）的具体方法为：所述粗蛋白依次经过Sephadex G-100凝胶过滤柱、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤柱、HiTrap Capto Q离子交换层析柱和Superose-12凝胶过滤柱，取具有溶栓活性的洗脱液，得到鼠妇纤溶酶。

2.根据权利要求1所述鼠妇纤溶酶，其特征在于步骤（1）中将鼠妇用6~10倍质量的水浸泡0.5~2 h，然后加入超微粉碎机中进行湿法超微粉碎。

3.根据权利要求2所述鼠妇纤溶酶，其特征在于所述湿法超微粉碎的温度为0-40℃，时间为5~30 min。

4.根据权利要求2或3所述鼠妇纤溶酶，其特征在于步骤（2）中将所述提取液采用截留分子量为80kDa~100kDa的中空纤维膜进行分离，取透过液，采用截留分子量为4kDa的中空纤维膜进行分离，取截留液，得到分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分。

5.根据权利要求4所述鼠妇纤溶酶，其特征在于步骤（3）中所述硫酸铵沉淀法具体为：在所述分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分中加入硫酸铵至饱和度为75-85%，静置后离心，取沉淀，得到粗蛋白。

6.根据权利要求5所述鼠妇纤溶酶，其特征在于所述分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分中先加入硫酸铵至饱和度为35-65%，静置后离心，取上清液；然后在所述上清液中加入硫酸铵至饱和度为75-85%，静置后离心，取沉淀，得到粗蛋白。

7.根据权利要求6所述鼠妇纤溶酶，其特征在于所述分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分中先加入硫酸铵至饱和度为55-65%，静置后离心，取上清液；然后在所述上清液中加入硫酸铵至饱和度为75-85%，静置后离心，取沉淀，得到粗蛋白。

8.权利要求1所述鼠妇纤溶酶在制备治疗血栓性疾病药物中的应用。