[发明专利]一种鼠妇纤溶酶及其应用

说明书

本发明提供一种鼠妇纤溶酶及其应用，涉及制药领域。所述鼠妇纤溶酶，具有溶栓和抗凝活性，采用如下方法制备：（1）将鼠妇采用湿法超微粉碎，获得提取液；（2）从所述提取液中提取分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分；（3）对步骤（2）所述分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分采用硫酸铵沉淀法进行纯化，获得粗蛋白；（4）将所述粗蛋白经凝胶过滤层析和阴离子交换层析，取具有溶栓活性的洗脱液，得到鼠妇纤溶酶。本发明首次发现了鼠妇纤溶酶PSLTro01，同时具有较强的溶栓和抗凝的活性，溶栓作用相对温和，可以用于制备治疗血栓性疾病药物。

技术领域

本发明涉及制药领域，具体涉及一种鼠妇纤溶酶及其应用。

背景技术

血栓性疾病是一类发病率较高、严重危害人类健康的疾病，主要包括心肌梗死，中风，脑栓塞，肺血栓等。血栓性疾病在全球范围内呈现渐增之势。据统计，全球每年平均约有1200万人死于心脑血管病，占所有死亡人数的1/4，而这些死者80%在发展中国家。预计在2020年全球每年将有2500万人死于心脑血管疾病。在中国这一比例更为惊人，据2010年《中国卫生统计提要》数据，心脑血管疾病导致的死亡人数已超过全国总死亡人数的40%，高居我国居民死因的首位。每年全国心脑血管病死亡人数达260万人，心脑血管病的复发率也很高，五年内复发率高达42%，存活的患者75%致残，其中40%以上重残。

目前，根据血栓形成的机制, 抗栓药物主要分为抗血小板药物，抗凝药物和溶栓药物。其中溶栓药物是广泛应用于临床治疗血栓最有效的药物，如尿激酶，链激酶，组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)等。虽然这些溶栓药物大幅度降低了血栓性疾病的致死率和致残率，但是仍然具有较多的缺点，例如尿激酶虽然具有非常好的溶栓活性，但是抗凝活性较差，因此尿激酶仅能用于溶栓，不能用于预防血栓的形成。目前市场上很少有药物同时具有溶栓和抗凝作用。因此，寻找一种副作用小，避免再阻塞和再梗死的天然溶栓抗凝药物势在必行。

鼠妇为甲壳纲等足目鼠妇科动物鼠妇Porcellio scaber Latreille的干燥虫体，别名潮虫，地虱，西瓜虫，豌豆虫等，始载于《神农本草》，具有破血利水，解毒止痛之功效。鼠妇作为一味传统的虫类中药，临床应用较为广泛，可用于治疗中重度癌性疼痛，扁平疣，痔疮，百日咳等，现代研究表明鼠妇具有镇痛，抗炎，抗肿瘤的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种鼠妇纤溶酶，同时具有溶栓和抗凝活性。

本发明的另一目的是提供所述鼠妇纤溶酶在制备治疗血栓性疾病药物中的应用。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种鼠妇纤溶酶，具有溶栓和抗凝活性，采用如下方法制备：

（1）将鼠妇采用湿法超微粉碎，获得提取液；

（2）从所述提取液中提取分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分；

（3）对步骤（2）所述分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分采用硫酸铵沉淀法进行纯化，获得粗蛋白；

（4）将所述粗蛋白经凝胶过滤层析和阴离子交换层析，取具有溶栓活性的洗脱液，得到鼠妇纤溶酶。

在本发明中，步骤（1）中将鼠妇用6~10倍质量的水浸泡0.5~2 h，然后加入超微粉碎机中进行湿法超微粉碎。

优选的技术方案中，所述湿法超微粉碎的温度为0-40℃，时间为5~30 min。

在本发明中，步骤（2）中将所述提取液采用截留分子量为80kDa~100kDa的中空纤维膜进行分离，取透过液，采用截留分子量为4kDa的中空纤维膜进行分离，取截留液，得到分子量为4kDa~100kDa的蛋白组分。