[发明专利]高正电荷荧光蛋白在糖胺聚糖分析检测中的应用有效
申请号: | 201510044900.0 | 申请日: | 2015-01-28 |
公开(公告)号: | CN104678092B | 公开(公告)日: | 2017-06-06 |
发明(设计)人: | 李福川;王文爽;张晓茹;韩乃寒;韩文君;李瑞娟 | 申请(专利权)人: | 山东大学 |
主分类号: | G01N33/52 | 分类号: | G01N33/52;G01N21/64 |
代理公司: | 济南金迪知识产权代理有限公司37219 | 代理人: | 朱家富 |
地址: | 250199 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 正电荷 荧光 蛋白 聚糖 分析 检测 中的 应用 | ||
1.高正电荷荧光蛋白作为荧光标记物在糖胺聚糖分析检测中的应用,具体步骤如下:
(1)使样品与高正电荷荧光蛋白接触,进行孵育结合,孵育时间5~30 min,孵育后待测样品;
(2)去除孵育后待测样品中未与糖胺聚糖结合的高正电荷荧光蛋白,或者采用荧光淬灭剂淬灭孵育后待测样品中未与糖胺聚糖结合的高正电荷荧光蛋白,制得待检测样品;
(3)对待检测样品进行荧光测定,根据荧光强度对样品中糖胺聚糖含量进行定性和/或定量分析;
所述高正电荷荧光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述步骤(1)中的样品为液体、固相载体、细胞、组织、器官。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述步骤(1)中,高正电荷荧光蛋白的接触浓度为0.01-5.0μg/ml。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述步骤(2)中,荧光淬灭剂选自:石墨烯、纳米金和/或有机小分子荧光淬灭剂。
5.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述步骤(3)中,定量分析是通过检测不同稀释度的标准样品的荧光强度绘制标准曲线,根据标准曲线的浓度与荧光强度之间的线性关系获得线性方程,将待测样品的荧光强度数值代入所得线性方程,计算获得样品中糖胺聚糖的含量。
6.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述步骤(3)中荧光测定为采用荧光显微镜、流式细胞仪或活体成像设备进行定性分析。
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