[发明专利]一种气质法快速测定畜禽肉中β-兴奋剂的前处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种气质法快速测定畜禽肉中β-兴奋剂的前处理方法。

背景技术

特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺属于β-肾上腺素能受体兴奋剂，均具有促进动物体内营养物质由脂肪组织向肌肉组织转移的作用。但是动物在食用含特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的饲料后，会造成药物在肌肉及组织中不同程度的残留，人体过量的摄入这种药物会发生中毒等毒副作用，另外还可引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。因此很多国家对此类药物的最高残留量都有严格规定，由于近年来我国加大了对克伦特罗使用的监管力度，有些不法分子转而非法使用特布他林、沙丁胺醇、莱克多巴胺，影响了我国的畜禽产品的安全，严重威胁了人民的生命健康。因此对于研究猪肉为代表的动物组织中同时测定特布他林、沙丁胺醇莱、克多巴胺，克伦特罗4种β-兴奋剂的检测技术具有重大而深远的现实意义。传统的处理方法在提取过程中一般采用三种以上的溶剂，容易造成目标物的损失，实验的准确度低，步骤多，并且会造成环境的污染。

发明内容

本发明主要解决现有技术所存在的技术问题，从而提供一种气质法快速测定畜禽肉中β-兴奋剂的前处理方法。

本发明是一种气质法快速测定畜禽肉中β-兴奋剂的前处理方法，仪器包括：气相色谱--质谱联用仪、高速冷冻离心机、固相萃取小柱WCX、SCX、MCX、固相萃取装置和氮吹仪；试剂包括：高氯酸、甲醇、氨水、甲苯、N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺即BSTFA和纯度≥98%的标准品。

作为优选，所述气相色谱--质谱联用仪为安捷伦7890-5975C相色谱--质谱联用仪，色谱、质谱结构精准。

作为优选，所述标准品包括沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、硫酸特布他林和莱克多巴胺，为四种β-兴奋剂。

本发明一种气质法快速测定畜禽肉中β-兴奋剂的前处理方法的步骤为：

a、标准溶液的配制：准确称取四种标准品1mg，用甲醇定容至10mL，配成0.1g/L的标准储备液，至于4℃冰箱中避光保存。使用时用甲醇逐级稀释储备液，配制成50、100、500、1000μg/L的标准溶液；

b、样品提取：准确称取捣碎的鲜肉2g于50mL离心管中，加入5%的高氯酸10mL，涡旋混合，超声提取30min，于高速离心机10000r/min离心15min，倾出上清液后再用5%的高氯酸10mL重复提取，合并上清液，待净化；

c、样品净化：依次用3mL甲醇和3mL去离子水活化平衡固相萃取小柱WCX，取1.3上清液以1mL/min的流速过柱，然后分别用3mL去离子水和3mL甲醇淋洗SPE柱，抽干后用5%氨化甲醇5mL淋洗柱子，收集洗脱液，经氮吹干后备用；

d、衍生化：吹干物加入衍生化试剂BSTFA+1%TMCS80μL，于具塞试管中涡旋混合器充分混匀，在80℃的烘箱中加热30min，氮气吹干，加甲苯0.5mL溶解供GC-MS分析，同时标准溶液氮气吹干，也按样品同步进行衍生化；

e、气相色谱或质谱：

（1）、检测气相色谱或质谱条件：HP-5ms石英毛细管柱的规格为30m×0.25mm×0.25μm，进样口温度为280℃，载气为高纯氦气，纯度≥99.999%；

（2）、以不分流方式进样，进样量为1μl；

（3）、进行升温，首先120℃保持1min，以10℃/min上升至230℃，保持5min，再以10℃/min上升至280℃，保持3min；

（4）、电子轰击源，电离电压为70eV，接口温度为280℃；

（5）、溶剂延迟10min；

（6）、选取SIM模式，监测离子。

作为优选，所述样品提取中捣碎的鲜肉要精确到0.01g，结果更加准确。

本发明的有益效果是：本发明采用气质法，建立了比现有文献报道都简单的动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺等四种β-肾上腺素能受体兴奋剂的前处理方法，在样品提取中主要采用高氯酸一种提取溶剂，不仅步骤少，可以避免目标物的损失，提高了实验的准确度，溶剂用的种类少了可以避免因实验带来的环境污染。4种兴奋剂在50-1000μg/L的范围具有良好线性，相关系数在0.995以上, 加标回收率在84.32～103.15%之间，RSD在1.35～4.78%之间，准确可靠在气相色谱定性的基础上，从结构上得到化合物特征碎片离子质谱图，避免了假阳性结果的出现，并且其最低检出限和加标回收率符合目前国内外检测要求。

附图说明