[发明专利]检测大肠杆菌O157:H7的双抗ELISA试剂盒在审
申请号: | 201510048127.5 | 申请日: | 2015-01-29 |
公开(公告)号: | CN104730246A | 公开(公告)日: | 2015-06-24 |
发明(设计)人: | 张雪寒;何孔旺;李盟;汪伟;俞正玉;倪艳秀;温立斌;李彬;周俊明;王小敏 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577 |
代理公司: | 四川君士达律师事务所 51216 | 代理人: | 芶忠义 |
地址: | 210009 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 大肠杆菌 o157 h7 elisa 试剂盒 | ||
1.检测大肠杆菌O157:H7的双抗ELISA试剂盒,其特征在于:包括:1)酶标板,2)单抗,3)酶标试剂,4)底物显色液,5)终止液,6)标准抗原,7)阴性标准对照,8)10×洗涤液,所述的酶标板为包被有兔源大肠杆菌O157:H7抗血清的96孔板,包被浓度为3.2ug/mL,所述大肠杆菌O157:H7抗血清指菌体浓度为109CFU/mL的大肠杆菌O157:H7,甲醛灭活后,四次免疫家兔后制备所得。
2.根据权利要求1所述的检测大肠杆菌O157:H7的双抗ELISA试剂盒,其特征在于:
所述的酶标板包被液为pH9.6的碳酸盐缓冲液,且酶标板为2块;
所述的单抗为PBS缓冲液1:400稀释的大肠杆菌O157:H7紧密素单克隆抗体EO06;
所述的酶标试剂为PBS缓冲液1:5000稀释的HRP-羊抗鼠IgG;
所述的底物显色液为单组份3,3’,5,5’-四甲基联苯胺溶液;
所述的终止液为2M的硫酸溶液;
所述的标准阳性抗原为大肠杆菌O157:H7甲醛灭活48h所制备的全菌抗原;
所述的阴性标准对照为大肠杆菌O157:H7培养用EC肉汤培养基;
所述的10×洗涤液为含有质量浓度分别为5%Tween-20、8.5%氯化钠、0.2%氯化钾、2.9%磷酸氢二钠和0.2%磷酸氢二钾的水溶液。
3.根据权利要求1所述的检测大肠杆菌O157:H7的双抗ELISA试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒操作步骤如下:
1)准备:从冰箱取出试剂盒,室温放置30min。用蒸馏水将10×洗涤液稀释成1×洗涤液;
2)加样:取出酶标板,固定于框架上,分别设置阴阳性对照孔、待检样品孔和空白对照,记录各孔位置。待检样品、阳性对照和阴性对照加入待样品孔、标准品孔,100uL/孔。空白对照孔不加;
3)温育:37℃湿盒内孵育1h;
4)洗板:弃去液体,吸水纸拍干,每孔加洗涤液250uL,静置3min,甩去洗涤液,如此重复洗板3次;
5)加酶标试剂:每孔加入酶标试剂100uL;
6)洗板:同步骤(4);
7)显色:每孔加入底物显色液100uL,轻轻震摇30s,室温避光反应15min;
8)终止:每孔加入50uL终止液终止反应;
9)测值:在自动酶联检测仪测定各孔的光密度吸收值(OD450nm);
10)结果判定。
4.根据权利要求3所述的检测大肠杆菌O157:H7的双抗ELISA试剂盒,其特征在于:判定标准为:光密度吸收值≥0.231,且S/N≥2.1为阳性;光密度吸收值<0.231,且S/N<2.1为阴性。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江苏省农业科学院;,未经江苏省农业科学院;许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510048127.5/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。