[发明专利]一种提高鸭黄病毒病毒滴度的培养方法

权利要求书

1.一种提高鸭黄病毒病毒滴度的培养方法，其特征在于：其包括以下步骤：

A、DMEM培养液的配制：将DMEM干粉溶于去离子水中，搅拌至完全溶解后，调节pH值至6.8～7.8，并用≤0.22μm的无菌滤膜进行除菌过滤，置于≤4℃的冰箱待用；

B、往上述的DMEM溶液中加入占DMEM培养液体积1％～8％的胎牛血清后，接种细胞进行单层培养；

C、待单层细胞培养好后，弃去培养容器内的DMEM培养液，并用无菌洗液洗；

D、弃去无菌洗液，然后往培养容器内加入亲和剂和步骤A所述的DMEM培养液，其中亲和剂的体积用量为DMEM培养液体积用量的0.01％～1％；

E、将培养容器置于细胞培养箱中静置培养1min～30min后，接种鸭黄病毒，混合均匀后置于细胞培养箱中培养2～5天，收获病毒液。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：步骤B中所述的细胞为Vero细胞、293细胞、ST细胞、BHK细胞中的一种。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：步骤C中所述的无菌洗液为去离子水、PBS缓冲液、无血清DMEM培养液中的一种。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：步骤D中所述的亲和剂由以下按质量百分数计的各组分制备而成：

5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于：步骤D中所述的亲和剂由以下按质量百分数计的各组分制备而成：

6.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于：步骤D中所述的亲和剂由以下按质量百分数计的各组分制备而成：

7.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于：所述无机盐为硫酸钠、磷酸氢二钠、氯化钾、氯化钠中的一种或两种以上。

8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于：所述的硫酸钠占亲和剂总量的0.15～0.3％；所述的磷酸二氢钠占亲和剂总量的0.1-1.6％；所述的氯化钠占亲和剂总量的0.09-0.9％；所述的氯化钾占亲和剂总量的0.01-1％。

9.根据权利要求4～6中任一项所述的培养方法，其特征在于：所述的亲和剂是按以下步骤制备而成的：按配方量称取丙二酸、磷酸、山梨酸、苹果酸、无机盐，将上述组分溶于配方量的去离子水中，过滤即得。