[发明专利]pHAb-FAST人源抗体表达载体系统及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及pHAb-FAST人源抗体表达载体系统及其使用方法。

背景技术

随着基因重组技术，杂交瘤技术以及PCR技术的成熟，单克隆抗体药物的产生成为可能。自1986年第一种单克隆抗体药物Orthoclone Okt3上市至今的短短25年间，已有35种单克隆抗体药物相继批准上市，其治疗领域涵盖了20多种疑难重症，在有效缓解和治疗疾病的同时也为各制药公司赚取了巨额利润。据医药领域权威预测公司IMS health公司的预测，到2016年，全球销售排行前50的药物中单克隆抗体类药物将占11个，而在前10名中，单抗药物将占据6个席位，分别是排名第一位的Humira(adalimumab)，排名第二位的Avastin(bevacizumab)，排名第4位的Rituxan(rituximab)，排名第6位的Herceptin(trastuzumab)，排名第7位的Remicade(infliximab)以及排名第10位的Prolia(denosumab)。在肿瘤治疗领域，销售额排名前5的药物中单抗类药物将占据4个席位，分别是Avastin(bevacizumab)，Rituxan(rituximab)，Herceptin(trastuzumab)和Erbitux(cetuximab)。在抗风湿病领域的前5名药物中，单抗药物亦将占有4个席位：Humira(adalimumab)，Remicade(infliximab)，Simponi(golimumab)，和Actemra(tocilizumab)。由此可见，单克隆抗体药物已经成为生物技术药物领域中的新秀，随着新靶点的不断引入，单克隆抗体药物的治疗领域也将进一步扩大，单克隆抗体的开发越来越受到各国科学家和各大知名药厂的关注和青睐。

另外，从25年的上市单抗药物的类型来看，单克隆抗体药物经历了由鼠源抗体到嵌合抗体到人源化抗体到全人抗体的演变，随着这种演变的发生，其治疗效果有了明显的提高，副作用有了显著降低。所以，含有人抗体恒定区的抗体类型(嵌合抗体/人源化抗体/全人抗体)将成为今后单克隆抗体药物的主流。

单克隆抗体药物的产生的过程中均需要构建特定抗体的表达载体或是抗体库。无论是经过噬菌体展示技术产生的优化抗体片段(Fab、scFv)，还是通过哺乳动物细胞展示技术筛选全长抗体，均需要将抗体的轻链可变区和重链可变区与人抗体的恒定区相连并确保正确表达和顺利分泌。到目前为止，虽然有多种商业化的表达载体，但是针对人源抗体分子构建的可用载体很少，而且现有的表达载体均为单质粒系统且需要通过多次酶切连接才能够在同一表达载体上同时表达两种成分(如抗体重链和抗体轻链)，构建步骤繁琐，时间耗费长，至今无商业化的高效人源抗体表达载体系统可供选用。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种高效的人源抗体表达载体系统。运用本发明的所述表达载体系统，借助重叠PCR扩增技术，无需酶切连接过程，即可高效快速地获得具有表达功能的人源抗体表达载体；通过所获得的人源抗体表达载体可在哺乳动物细胞内高效表达全长抗体。

本发明第一方面公开了一种pHAb-FAST人源抗体表达载体系统，包括pHAb-FAST 1载体和pHAb-FAST 2载体，所述pHAb-FAST 1载体包含依次排列的EF1α启动子，人抗体轻链信号肽序列和人抗体重链恒定区序列；所述pHAb-FAST 2载体包含依次排列的人抗体轻链恒定区序列、IRES序列和人抗体重链信号肽序列。

优选的，所述pHAb-FAST 1载体中，EF1α启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

优选的，所述pHAb-FAST 1载体中，人抗体轻链信号肽序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

优选的，所述pHAb-FAST 1载体中，人抗体重链恒定区序列的核苷酸序列为如SEQ ID NO：5所示。

进一步的，所述pHAb-FAST 1载体中，还包括基本真核表达载体所需的转录终止信号(polyA尾)、抗氨苄青霉素抗性基因及大肠杆菌DNA复制基本元件。

优选的，所述pHAb-FAST 2载体以T载体形式存在。

优选的，所述pHAb-FAST 2载体中，人抗体轻链恒定区序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

优选的，所述pHAb-FAST 2载体中，IRES序列的核苷酸序列为如SEQ ID NO：7所示。