[发明专利]肝素修饰的可断键阿霉素脂质体制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种肝素修饰的可断键阿霉素脂质体(Hep-S-S-DOX-Lip)制剂，本发明还公开了这种Hep-S-S-DOX-Lip制剂的制备方法。

背景技术

肝素(heparin，Hep)是一种酸性的粘多糖，在临床上广泛用于抗凝血和抗血栓。近年来，人们在辅助使用肝素治疗和预防癌症并发的静脉血栓时，发现肝素可以抑制肿瘤转移，延长恶性肿瘤患者的寿命。因此，国内外对肝素抗转移机制进行了大量的基础和临床研究。研究结果表明，肝素的抗肿瘤转移作用涉及到肿瘤形成与生长的各个环节。肝素促进组织因子旁路途径抑制物的释放从而抑制肿瘤血管的新生。肝素可以抑制肝素酶的活性，因此干预肿瘤细胞的侵袭和转移。

相对于开发昂贵的抗肿瘤转移的药物，科学家们一直致力于应用纳米载体治疗肿瘤转移。但将刺激响应型纳米药物载体用于转移瘤的研究报道还很少。该载体是指在体循环时维持原形，到达肿瘤位点时，肿瘤的特有环境将刺激载体发生转变，促进药物在肿瘤部位的释放，进一步提高载体的靶向性和有效性。其中，利用二硫键实现纳米载体在肿瘤细胞内的触发表现出广泛的应用前景。二硫键在体内血液循环过程中可长期稳定存在，但在富含还原型谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)的环境中会发生断键反应，而GSH在肿瘤细胞内的浓度(2～8mmol/L)要比其在血浆中的浓度(1～2μmol/L)高1000倍以上，因此，若通过二硫键负载药物，则可以利用这种浓度差实现药物在肿瘤细胞内的控制释放。

本发明选择的模型药物为阿霉素(Doxorubicin，DOX)。为橙红色结晶粉末，别名多柔比星、羟柔红霉素、14-羟正定霉素，熔点204-205℃，分子量为579.98。其结构中带有羟基，呈弱碱性。阿霉素作为经典的化疗药物，抗肿瘤机制明确，主要是抑制RNA和DNA的合成。1974年即在美国获准临床应用，用于治疗各种恶性肿瘤，如乳腺癌、肺癌、淋巴瘤、神经细胞瘤等。注射后广泛分布于心、肝、脾、肺、肾中，在血浆中消失迅速，且其不良反应较多，最严重的是剂量依赖性心脏毒性和神经毒性，不仅影响了患者的生存质量，而且使阿霉素的应用受到限制，这也一直是化学结构改造和新剂型研发工作的焦点。

本发明是在构建阿霉素脂质体(DOX-Lip)的基础上，通过共价键结合的方式将肝素修饰材料修饰在脂质体表面。本发明用肝素修饰阿霉素脂质体，发现具有抗肿瘤细胞转移和生长的作用。

发明内容

本发明的目的是制备肝素修饰的可断键阿霉素脂质体(Hep-S-S-DOX-Lip)，延长阿霉素的体内半衰期，提高阿霉素的生物利用度，并发挥肝素抗肿瘤转移的作用。

本发明的目的是通过如下措施来达到：

本发明Hep-S-S-DOX-Lip制剂，含下列组分及重量比：

阿霉素  1

肝素修饰材料  1～4

大豆卵磷脂  10～80

胆固醇  1～8

十八胺  1～4

本发明中肝素修饰材料(Hep-DTSP)的制备方法如下：

利用乙二胺的两端氨基，通过聚合物末端反应，将肝素的羧基和3，3′-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)(DTSP)的酯基桥接，获得二硫键修饰的肝素(Hep-DTSP)。

优选地，称取一定量的Hep溶于pH 7.2的PBS溶液中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)，再缓慢滴加乙二胺，室温搅拌反应。透析法除去未反应物质。将透析液冻干得白色粉末。经将白色粉末溶于水中，3，3′-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)(DTSP)溶于二甲基甲酰胺(DMF)，将DTSP的DMF溶液缓慢滴加到水溶液中，然后滴加三乙胺室温反应，透析除去未反应物质。旋转蒸发除去溶剂，当溶剂剩余少量时，加乙醇沉淀产物，离心弃上清，将沉淀真空干燥，得白色固体。经¹H NMR鉴定为目标产物Hep-DTSP。

本发明采用薄膜分散法，制备步骤如下：

a.将处方量的大豆卵磷脂、胆固醇、十八胺溶于三氯甲烷中；

b.在水浴30℃～40℃条件下于旋转蒸发仪上旋蒸去除三氯甲烷；待有机溶剂挥干后，继续旋蒸2h；

c.加入PBS缓冲溶液，在水浴30℃～40℃条件下水合1h形成白色的分散乳液；

d.将步骤c中的乳液用探头超声仪进行超声分散，即得空白脂质体；