[发明专利]高效非整合性人类iPSC诱导平台

权利要求书

1.用于将人体细胞诱导为iPSC的组合物，由前诱导剂和后诱导剂组成，其中，

前诱导剂的活性成分为：转化生长因子β抑制剂、糖原合成酶激酶3抑制剂、cAMP激动剂、S-腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂和p21活化激酶抑制剂；

后诱导剂的活性成分为：糖原合成酶激酶3抑制剂、选择性ATP非竞争性的MEK抑制剂和S-腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：转化生长因子β抑制剂选自E-616452、SB431542、LDN193189、Dorsomorphin、LY2109761、LY2157299、SB525334、SB505124、GW788388、LY364947、D4476、IDE1、ITD1、SD208、A83-01。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：糖原合成酶激酶3抑制剂选自CHIR-99021、TWS119、SB216763、CHIR-98014、Tideglusib、SB415286、LY2090314、AZD1080、3F8、L308、NSC693868、Kenpaulone、TCG24、TCS2002、FRATide、Indirubin-3’-oxime、ARA-A014418、BIO、MeBio。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：cAMP激动剂选自Forskolin、NKH477。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：S-腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂选自DZNep、UNC0224、UNC0642、UNC0646、UNC0638、SGC0946、PFI2、C21、TC-E5003、Chaetocin、BIX01294。

6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：p21活化激酶抑制剂选自IPA-3、FRAX486。

7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：选择性ATP非竞争性的MEK抑制剂选自PD0325901、10Z-Hymenialdisine、PD184352、PD198306、PD334581、SL327、U0126。

8.一种将人体细胞诱导为iPSC的方法，包括如下步骤：

1）将人体细胞置于转染培养液中，加入附加型载体及至少一种有利于iPSC诱导的外源基因进行转染培养；

2）将转染后的细胞恢复培养，之后加入ESC培养液中，添加前诱导剂进行诱导培养，得到前诱导培养细胞；

3）将前诱导培养细胞置于添加有后诱导剂的ESC培养液中，继续培养得到iPSC；

前诱导剂和后诱导剂的组成如权利要求1～7任意一项所述。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：有利于iPSC诱导的外源基因选自OCT3/4、 p53 shRNA、SOX2、KLF4、 L-MYC、LIN28、Nanog。

10.一种将人体细胞诱导为iPSC的培养基，由前诱导培养基和后诱导培养基组成，其特征在于：前诱导培养基中添加有权利要求1～7任意一项组合物中的前诱导剂，后诱导培养基中添加有权利要求1～7任意一项组合物中的后诱导剂。