[发明专利]转录组文库的构建方法

权利要求书

1.一种转录组文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

S1，对待测菌种中总RNA是否存在污染进行鉴定；

S2，从未受污染的待测菌种的所述总RNA中去除rRNA，得到mRNA和非编码RNA；以及

S3，对所述mRNA和非编码RNA进行转录组文库的构建，得到所述转录组文库。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S1中，利用rRNA对待测菌种中的所述总RNA是否存在污染进行鉴定。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述总RNA中的所述rRNA为16S rRNA、18S rRNA或ITS rRNA。

4.根据权利要求2或3中所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S1包括以下步骤：

S11，对所述待测菌种的总RNA进行反转录，得到cDNA；

S12，以所述cDNA为模板，对所述待测菌种的所述rRNA进行扩增并测序，得到测序序列；

S13，将所述测序序列与NCBI核苷酸数据库中的参考序列进行同源性比对，得到比对结果；以及

S14，根据所述比对结果判断所述总RNA是否存在污染。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述rRNA为16S rRNA、18S rRNA或ITS rRNA的全长序列。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S13中，所述比对结果为：

(1)所述测序序列与至少前10条同源性高的所述参考序列来源于同一菌种，且所述菌种为目的菌种；或者

(2)所述测序序列与至少前10条同源性高的所述参考序列来源于两种或两种以上的菌种。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，

当所述比对结果为(1)时，所述步骤S14包括：

根据所述比对结果，查看所述测序序列的测序峰图是否存在套峰现象，若不存在，则判断所述总RNA不存在污染；

当所述比对结果为(2)时，所述步骤S14包括：

根据所述比对结果，查看所述测序序列的测序峰图是否存在套峰现象，若存在，则判断所述总RNA存在污染。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S2采用Ribo-zero试剂盒从所述总RNA中去除所述rRNA。

9.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S3包括以下步骤：

S31，对所述mRNA和非编码RNA进行反转录，得到双链cDNA；

S32，对所述双链cDNA依次进行末端修复、加A和连接头，得到带接头修复双链cDNA；

S33，对所述带接头修复双链cDNA进行USER酶消化及PCR富集，得到所述转录组文库。

10.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S32之后以及所述步骤S33之前，还包括对所述带接头修复双链cDNA进行片段大小选择的步骤，优选采用磁珠对所述带接头修复双链cDNA进行片段大小选择。